ラミニンの神経突起伸展作用を持つ合成ペプチドの臨床応用:特に中枢神経系の再生治療薬として

具有神经突延伸作用的层粘连蛋白合成肽的临床应用：特别是作为中枢神经系统的再生治疗剂。

• 批准号: 02670516
• 负责人: 田代 謙一郎
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: 佐賀医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670516/
• 关键词: ラミニン; PA22ー2; IKVAV; IKLLI; 細胞接着; 神経突起伸展; 固体因子; 液性因子

新生ラット脳の皮質,線条体,黒質,縫線核,前角及び知覚神経節から細胞を取り出し、ラミニン及び合成ペプチドの細胞接着・神経突起伸展活性を調べた。ラット血清の存在下で差異がみられたのは知覚神経節細胞のみで,ラミニン,ペプチドPA22ー2に対して細胞はポリリジンや非コ-テイング培養皿に比べて接着と神経突起伸展が強くみられた。無血清培養液での脳神経細胞の初代培養は条件が難しく,現在もラミニンとペプチドの細胞接着と神経突起伸展活性について検討中である。PC12細胞に対する神経突起伸展活性をラミニンA鎖のペプチドPA22ー2は示し、その活性中心はIKVAV(IleーLysーValーAlaーVal)である。この配列の上流にIKLLI(IleーLysーLeuーLeuーIle)の配列を含むペプチドPA57にもPA22ー2と同様の細胞接着・伸展・移動,神経突起伸展の活性があり,しかも両ペプチドには神経細胞増殖,ヘパリン結合作用のあることもわかった。この両ペプチドのN末端にシスチンを付けたペプチドを合成し、生物活性とコ-テイング率を比較したところ、シスチンがなければコ-テイング率が極めて悪くなるが、IKVAVはシスチンの有無にかかわらず細胞接着と神経突起伸展活性を示した。しかし、IKLLIはシスチンがなければ細胞接着活性を持たず、神経突起伸展活性のみを示した。ラミニンは基底膜の主要成分で固体因子として最初にラミニンと細胞が接着し、その後細胞生理活性が示されと考えられるが、ラミニンの一部の配列であるIKLLIには液性因子として神経突起伸展に対し活性を示す可能性がある。現在はこの配列の修飾ペプチドを合成し神経突起伸展活性の液性因子の基本分子構造を検討中である。

从皮质，纹状体，底细胞，raphe核，新遗传大鼠脑的前角和感觉神经节中去除细胞，并检查细胞粘附和层粘连蛋白和合成肽的神经突延伸活性。在感觉神经节细胞中大鼠血清存在的情况下，观察到唯一的差异，与层粘连蛋白和肽PA22-2相比，细胞显示出更强的粘附和神经突延伸。在无血清培养基中，很难对颅神经细胞进行一级培养，并且仍在研究层粘连蛋白和肽的细胞粘附和神经突延伸活性。层粘连蛋白A链肽PA22-2对PC12细胞表现出神经突的生长活性，其活性中心是IKVAV（Ile-Lys-lys-Val-Alla-Val）。还发现，该序列上游包含Iklli（ile-lys-leu-leu-leu）序列的肽PA57具有与PA222相同的细胞粘附，延伸，迁移和神经延伸活性，并且两种肽都具有神经元扩散和肝素结合效果。当合成了与两种肽N末端附着的胱氨酸的肽合成并比较生物学活性和co-tey率时，如果没有胱氨酸，共蛋白的速率将非常差，但是IKVAV表现出细胞粘附和神经突的产物，具有或没有cystine。但是，Iklli没有胱氨酸没有细胞粘附活性，仅显示神经突伸出活性。层粘连蛋白是基底膜的主要成分，被认为首先粘附于层粘连蛋白作为固体因子，然后显示出细胞生物活性，但是层粘连蛋白序列的一部分Iklli可能是针对神经突延伸作为体液因子的活性。目前，我们正在合成该序列的修饰肽，并研究神经突延伸活性的体液因子的基本分子结构。

项目成果

田代 謙一郎,佐々木 信,山田 吉彦: "ラミニンA鎖の生物活性部位" 蛋白質核酸酵素. 35. 1551-1557 (1990)

Kenichiro Tashiro、Makoto Sasaki、Yoshihiko Yamada：“层粘连蛋白 A 链的生物活性位点”蛋白质核酸酶。 35. 1551-1557 (1990)

田代 謙一郎,山田 吉彦,Kleinman,H.K.,武市 昌士: "神経突起伸展作用をもつラミニンドメイン" 細胞. 22. 332-335 (1990)

Kenichiro Tashiro、Yoshihiko Yamada、Kleinman、H.K.、Masashi Takeichi：“具有神经突延伸效应的层粘连蛋白结构域”细胞。

Kleinman.H.K.,Sephel,G.C.Tashiro,K.,Weeks,B.S.Burrous,B.A,Adler ,S.H.Yamada.Y.,Martih,G.R.: "Laminin in neuronal development" ANN.NY.Acad.Sci.580. 302-310 (1990)

Kleinman.H.K.、Sephel、G.C.Tashiro、K.、Weeks、B.S.Burrous、B.A、Adler、S.H.Yamada.Y.、Martih、G.R.：“神经元发育中的层粘连蛋白”ANN.NY.Acad.Sci.580。

Tashiro,K.Sephel,G.C.Greatorex,D.Sasaki,M.Martin,G.R.Kleinman,H.K.Yamada,Y.: "The RGD containing site of the mouse laminin A chain is active for cell attachment,Spreading,migration and neurite outgrowth" J.Cell Physiology.

Tashiro,K.Sephel,G.C.Greatorex,D.Sasaki,M.Martin,G.R.Kleinman,H.K.Yamada,Y.：“含有小鼠层粘连蛋白 A 链位点的 RGD 对细胞附着、扩散、迁移和神经突生长具有活性”

田代 謙一郎,原 富英,武市 昌士: "神経突起伸展活性をもつラミニンの合成ペプチドPA22ー2とセロトニン受容体との関連性" 精神薬療基金研究年報. 22. (1991)

Kenichiro Tashiro、Tomihide Hara、Masashi Takeichi：“具有神经突生长活性的层粘连蛋白的合成肽 PA22-2 与血清素受体之间的关系”精神药理学治疗基金会研究年度报告 22。（1991）。