先天性免疫不全症におけるリンパ系幹細胞への欠損遺伝子の導入

将缺陷基因引入先天性免疫缺陷病的淋巴干细胞中

基本信息

批准号：
02670433
负责人：
宮川幸昭
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

先天性免疫不全症のうち、common variable immunodeficiency(CVID)についてのリンパ系幹細胞の培養法を確立した。方法は骨髄有核細胞をpercoll比重遠沈法で40%以上をstromal cell源とし60%層を幹細胞源した。(日本免疫學会抄録)。stromal cellの培養法は1.800ガウスの磁力線培養装置を使用して繊維芽細胞増殖因子、GーCSF GFーβ1の存在を基本に培養した。対照群として胎児骨髄細胞を使用した場合は,ILー1誘導stromal cell上には、前T細胞を主体としたリンパ系幹細胞が培養された。一方、ILー7誘導胎児stromal cell上には前B細胞を主体にしたリンパ系幹細胞が培養されてきた。他方、成人型stromal cellは極めてILー7に良く反応し前B細胞育成能を保有するstromal cellが誘導されてきた。先天性免疫不全症においては、B細胞欠損型CVIDにおいて上記の方法を使用してCVIDーstromal cellを誘導したところ、ILー1反応性stromal cellが誘導されたのみでILー7反応性strmal cellは誘導されてこなかった。しかも、CVIDのstromal cellのリンパ系幹細胞の育成能は、前T細胞を主体としたT細胞系のみで前B細胞及びB細胞の育成能はまったく証明されなかった。以上の結果より、CVIDのstromal cellは胎児型stromal cellであり、B細胞欠損型のCVIDは恐らくILー7反応性stromal cellの欠損により、B細胞系の欠落が引き起こされたと思われる。現在リンパ系幹細胞はmonoclonal抗体を使用した成績からCD34陽性、CD33陰性の多岐能分裂能を保有する幹細胞からTdT陽性,CD38陽性のリンパ系幹細胞に分化し、更にCD10、CD19、HLA DR陽性のB細胞系とCD5,CD7,CD2陽性のT細胞系に分化することが判明した。B細胞欠損型CVIDの骨髄細胞をin vitroで培養してCVIDの患児に養子移入すべき大量培養法を現在開発中である。

我们建立了一种用于治疗先天性免疫缺陷病之一的普通变异性免疫缺陷症（CVID）的淋巴干细胞培养方法。方法是采用Percoll密度离心收集骨髓有核细胞，其中40%以上的骨髓细胞为基质细胞来源，60%的骨髓为干细胞来源。（日本免疫学会摘要）。基质细胞培养方法基于成纤维细胞生长因子 G-CSF GF-β1 的存在，使用 1.800 高斯磁场培养装置。当胎儿骨髓细胞用作对照组时，在IL-1诱导的基质细胞上培养淋巴干细胞（主要是前T细胞）。另一方面，淋巴干细胞（主要是前 B 细胞）已在 IL-7 诱导的胎儿基质细胞上培养。另一方面，成体型基质细胞对IL-7反应非常好，并且已被诱导具有培养前B细胞的能力。在先天性免疫缺陷中，当在B细胞缺陷的CVID中使用上述方法诱导CVID基质细胞时，仅诱导IL-1反应性基质细胞，但未诱导IL-7反应性基质细胞。此外，CVID基质细胞生长淋巴干细胞的能力仅限于主要由前T细胞组成的T细胞谱系，而生长前B细胞和B细胞的能力根本没有被证明。从上述结果来看，CVID中的基质细胞是胎儿型基质细胞，而B细胞缺陷型CVID可能是由于IL-7反应性基质细胞缺乏而导致B细胞谱系缺乏所致。目前，根据单克隆抗体的结果，可以将淋巴干细胞从具有多能分裂能力的CD34阳性、CD33阴性干细胞分化为TdT阳性、CD38阳性淋巴干细胞，此外，还可以将CD10的淋巴干细胞分化为TdT阳性、CD38阳性淋巴干细胞。、CD19 和 HLA DR 阳性细胞被发现分化为 CD5、CD7 和 CD2 阳性 T 细胞谱系。我们目前正在开发一种大规模培养方法，可以在体外培养B细胞缺陷的CVID骨髓细胞，并过继转移给患有CVID的儿童。