バゾプレッシン産生細胞の複数支配に関する電顕免疫組織化学的研究

加压素产生细胞多重优势的电镜免疫组织化学研究

• 批准号: 01570019
• 负责人: 落合 英彦
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570019/
• 关键词: バゾプレッシンニュ-ロン; カテコ-ルアミン性神経支配; ペプチド性神経支配; 電顕免疫組織化学; PAP法; 金コロイド法; 凍結超薄切片; ロ-ウィクリルK4M

ラット視床下部室傍核のバゾプレッシン(VP)ニュ-ロンに対する種々のニュ-ロンの神経支配について、電顕免疫組織化学的手法を用いて追究した。始めに、包埋前PAP法と包埋後金コロイド法の組み合わせによる二重免疫染色法を用いて、カテコ-ルアミン(CA)の合成酵素であるド-パミン-β-水酸化酵素様陽性神経終末およびフェニルエタノ-ルアミンメチル基転移酵素様陽性神経終末の夫々が、VPの担体蛋白であるニュ-ロフィジンII(NPII)様陽性ニュ-ロンにシナプス様結合しているのを証明し、CAニュ-ロンのうちのアドレナリンまたはノルアドレナリンニュ-ロンによるVPニュ-ロンの神経支配を電顕免疫組織化学的に明らかにした。また、同様の方法を用いて、ニュ-ロペプチドY様陽性神経終末および心房性ナトリウム利尿ペプチド様陽性神経終末が夫々、NPII様陽性ニュ-ロンにシナプス様結合している事も明らかにした。ところで、包埋前PAP法と包埋後金コロイド法に用いられる試料は、加熱重合を必要とするエポキシ樹脂包埋試料であり、加熱による種々の抗原性の失活から、金コロイド法により検出できる抗原の種類は極めて少ない。そこで次に、低温重合が可能な樹脂であるロ-ウィクリルK4Mの包埋試料を用い、エポキシ樹脂による包埋試料で検出不可能な抗原の検出を試み、コリン性シナプス膜蛋白の一つであるシナプトフィジンが、下垂体後葉のVP性神経終末内微小胞に存在することを明らかにした。更に、抗原性の保持に関して最も優れていると思われる凍結超薄切片の金コロイド法への応用について検討し、種々の抗原の検出が可能であることを確認した。今後、ロ-ウィクリルK4Mの包埋の超薄切片および凍結超薄切片を用い、金コロイド法による多重電顕免疫染色法を応用して、個々のVPニュ-ロンに対する多種のニュ-ロンによる同時神経支配について追究していく。

使用电子显微镜免疫组织化学技术研究了大鼠下丘脑旁室核中各种神经元对加压素（VP）神经元的神经支配。首先，我们证明了多巴胺-β-羟化酶样阳性神经末端，它们是叶毒素（CA）的合成酶，以及苯甲基乙醇胺转甲基转移酶样正阳性神经末端，是对VP的载体蛋白（Neurophys II（NPI）的阳性蛋白的突触样键 - 电子显微镜免疫组织化学揭示了CA神经元中肾上腺素或去肾上腺素神经元神经元的神经元。使用类似的方法，还揭示了神经肽Y样正神经末端和心房纳妥肽样阳性神经末端分别与NPII样阳性神经元结合。顺便说一句，在装饰前的PAP方法中使用的样品和后胶胶金是环氧树脂包裹的样品，需要加热聚合，并且由于由于加热而灭活了各种抗原，因此很少有人可以通过胶体黄金检测到类型的抗原。接下来，我们尝试使用胆碱能膜蛋白突触蛋白，突触素（突触蛋白）（在佩特匹布特氏腹膜粘膜中的VP Nerver终端中的微壳体中，使用胆碱能突触膜蛋白之一）使用嵌入式样品，使用嵌入式样品检测在嵌入式样品中使用环氧树脂在嵌入式样品中检测到的抗原的抗原。此外，研究了将冷冻的超薄切片应用于胶体黄金方法（认为是维持抗原性最好的胶体金方法），并证实可以检测到各种抗原的检测。将来，我们将使用与Rowiklyl K4M嵌入的超薄切片和冷冻的超薄切片，并使用胶体金应用多个电子显微镜免疫染色方法来研究各种神经元的单个VP神经元的同时支配。

项目成果

Chikara Iwai: "Electron-microscopic immunocytochemistry of neuropeptide Y immunoreactive innervation of vasopressin neurons in the paraventricular nucleus of the rat hypothalamus." Acta Anat.136. 279-284 (1989)

Chikara Iwai：“大鼠下丘脑室旁核中加压素神经元神经肽 Y 免疫反应性神经支配的电子显微镜免疫细胞化学。”

中井康光: "脳ホルモンと神経伝達物質の相関ー電顕細胞化学的観察ー" ホルモンと臨床. 37. 811-818 (1989)

Yasumitsu Nakai：“脑激素和神经递质之间的相关性 - 电子显微镜细胞化学观察”激素和临床研究 37. 811-818 (1989)。

落合英彦: "バゾプレッシンニュ-ロンのアドレナリン性神経支配についての免疫電顕的観察" 解剖学雑誌. 64. 415 (1989)

Hidehiko Ochiai：“加压素神经元肾上腺素神经支配的免疫电子显微镜观察”解剖学杂志 64. 415 (1989)。

中井康光: "ペプチドニュ-ロンの神経性制御機構 Neuronal Regulation Mechanism of Peptide Neurons" 日本臨床. 48. (1990)

Yasumitsu Nakai：“肽神经元的神经调节机制”日本诊所 48。（1990）

Takumi Abe: "Immunoelectron microscopy of neurons containing atrial natriuretic peptide and their innervation of neurons containing vasopressin in the hypothalamic paraventricular nucleus and median eminence of th rat." J.Clin.Electron Microscopy. 22. 189

Takumi Abe：“免疫电子显微镜观察大鼠下丘脑室旁核和正中隆起中含有心房钠尿肽的神经元及其对含有加压素的神经元的神经支配。”