カエル卵母細胞におけるカイコ細胞質多核体病ウイルスRNA合成酵素の生成

青蛙卵母细胞中蚕胞质多角体病毒RNA合成酶的产生

基本信息

批准号：
01560098
负责人：
池上晋
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カイコ細胞質多核体病ウイルス(CPVと略称する)は10本の分節したゲノムニ本鎖RNA分子と、5種のポリペプチド、V1(分子量146K)、V2(分子量140K)、V3(分子量128K)、V4(分子量62K)、V5(分子量32K)から構成されている。ウイルス粒子には二本鎖RNAを鋳型として単鎖のmRNAを生成させるRNAレプリカ-ゼの他に、mRNAグアニリルトランスフェラ-ゼ、mRNAメチルトランスフェラ-ゼなどのキャッピング酵素が内在する。しかし、これらの酵素活性はウイルス粒子から可溶化されておらず、これらがどのペプチドに相当し、どのRNAセグメントによってフ-ドされているか明らかにされていなかった。本研究で、CPV粒子から10本の二本鎖RNAセグメントを分離・精製し、それぞれのセグメントを[^3H]UTPと共に無核アフリカツメガエル卵母細胞に注入し、RNA合成を誘起するRNAセグメントを探査した。その結果、セグメント2および3の加熱変性RNAを注入た際に,RNA合成量が増大することが判明した。セグメント2および3がコ-ドするペプチドはV2であった。したがって、V2がRNAレプリカ-ゼに他ならないことが結論ずけられた。本研究に関連して、イトマキヒトデ卵母細胞にCPVを注入したところ、アフリカツメガエルの場合と異なり、CPVタンパク質を生成することなく細胞は死に至ることが判明した。この致死因子は二本鎖RNAそのものであり、この二本鎖RNAによる致死作用には細胞内アクチンの重合が関与することがあきらかとなった。さらに、RNAポリメラ-ゼ反応を阻害する新規化合物を精製、単〓し、これがホルマイシンにきわめて類似の作用をもち、アフリカツメガエル卵母細胞に注入することによってリン酸化されることが示された。

蚕胞质多角体病毒（简称CPV）有10个分段的基因组双链RNA分子和5种多肽，V1（分子量146K）、V2（分子量140K）、V3（分子量128K）、V4（分子量128K）。分子量62K）和V5（分子量32K）。病毒颗粒含有RNA复制酶，它以双链RNA为模板生成单链mRNA，还含有加帽酶，例如mRNA鸟苷基转移酶和mRNA甲基转移酶。然而，这些酶活性尚未从病毒颗粒中溶解出来，也不清楚这些酶对应于哪些肽以及哪些RNA片段为它们提供营养。在这项研究中，我们从CPV颗粒中分离纯化了10个双链RNA片段，将每个片段注射到无核非洲爪蟾卵母细胞中，并提取了诱导RNA合成的RNA片段。结果发现，当注射片段2和3的热变性RNA时，RNA合成量增加。片段2和3编码的肽是V2。因此，可以得出结论，V2只不过是一种RNA复制酶。结合这项研究，当将 CPV 注射到海星卵母细胞中时，发现与爪蟾不同，细胞死亡时不产生 CPV 蛋白。这种致死因子是双链RNA本身，并且已经清楚细胞内肌动蛋白的聚合参与了双链RNA的致死作用。此外，我们纯化并分离了一种抑制RNA聚合酶反应的新型化合物，并表明其具有与福霉素非常相似的作用，并且当注射到非洲爪蟾卵母细胞中时它会被磷酸化。