2倍体野生種タバコプロトプラスト系における体細胞突然変異とDNA修復に関する研究

二倍体野生烟草原生质体系统体细胞突变与DNA修复研究

基本信息

  • 批准号:
    63560006
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.6万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1988
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1988 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1.ソマクローナル変異として生じる体細胞突然変異の生成量を推定する方法として、核DNAの制限酵素分解物と反復配列DNAプローグのサザンハイブリダイゼーションパターンを母植物と再分化植物間で比較する方法を検討した。材料にはミドリアマナを用い、核DNAのHaeIII分解物から190bpの反復配列DNAをクローニングした。カルス由来再分化植物について染色体変異、水溶性タンパクの等電点電気泳動パターン、および反復配列DNAのサザンハイブリダイゼーションパターンを比較したところ、反復配列DNAハイブリダイゼーションパターンの変異は染色体やタンパクの変異とは独立に、しかもカルス誘導初期に生じたものと考えられた。今後はこの原因が高頻度の塩基配列レベルの突然変異なのか、大規模な塩基のメチル化によるのかを検討する。いずれにせよ脱分化初期のDNA変化を高感度で検出できる方法だと考えられた。2.野生種タバコの核DNAの制限酵素分解物から数種の鎖長の反復配列と思われる配列を濃縮し大腸菌にクローニングした。今後はサザンハイブリダイゼーションにより反復配列であることの確認をとり、これをプローブにしてプロトプラスト由来再分化植物について比較を行う。3.タバコの分化を終了した緑葉にUVを照射した後、光回復あるいは暗回復を行わせ、抽出したDNAをマイクロコッカスノエンドヌクレアーゼで処理しピリミジンダイマー特異的な単鎖切断を起こさせた上でアルカリアガロースゲル電気泳動を行って、ピリミジンダイマーの修復能を推定した。その結果、分化した緑葉が明らかに光回復能をもつこと、またこの方法は非常に検出感度が高いことがわかった。今後はこの方法を用いて、培養細胞との比較により細胞分化とDNA修復能の関係を詳細に検討する。
1. 作为估计作为体细胞克隆突变产生的体细胞突变量的方法,我们考虑了一种比较母体植物和再生植物之间核DNA和重复DNA前体的限制酶消化的Southern杂交模式的方法。以 Midoriamana 为材料,从 HaeIII 消化的核 DNA 中克隆出 190 bp 的重复序列 DNA。愈伤组织衍生的再生植物中染色体突变、水溶性蛋白质的等电聚焦模式和重复序列DNA的Southern杂交模式的比较表明,重复序列DNA杂交模式的突变与染色体和蛋白质中的突变不同。这在愈伤组织诱导的早期阶段是独立发生的。未来我们将研究这是否是碱基序列水平的频繁突变引起的,还是大规模碱基甲基化引起的。无论如何,人们认为这种方法可以高灵敏度地检测去分化早期阶段的DNA变化。 2.从野生烟草的限制性内切酶消化的核DNA中浓缩几个链长的重复序列,并将其克隆到大肠杆菌中。今后,我们将通过Southern杂交确认其为重复序列,并以此为探针来比较原生质体来源的再生植物。 3.用UV照射分化的烟草绿叶后,进行光恢复或暗恢复,并用微球菌核酸内切酶处理提取的DNA,引起嘧啶二聚体特异性单链断裂,通过评估嘧啶二聚体的修复能力。进行碱性琼脂糖凝胶电泳。结果表明,分化的绿叶明显具有光恢复能力,该方法具有很高的检测灵敏度。今后,我们将利用这种方法,通过与培养细胞的比较,详细考察细胞分化与DNA修复能力之间的关系。

项目成果

期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
池田滋: 第61回日本遺伝学会.
池田茂:日本遗传学会第 61 届年会。
  • DOI:
  • 发表时间:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
池田滋: 第11回植物組織培養シンポジウム.
池田茂:第 11 届植物组织培养研讨会。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
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  • 作者:
  • 通讯作者:
池田滋: 育種学雑誌. 38(別冊1). 122-123 (1988)
池田茂:育种科学杂志 38(特刊 1)(1988 年)。
  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
池田滋: 遺伝学雑誌. 62. 560 (1988)
池田茂:遗传学杂志 62. 560 (1988)
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