がん抗原としのムチン型糖タンパク質の特性

粘蛋白型糖蛋白作为癌抗原的特性

基本信息

批准号：
63015043
负责人：
山科郁男
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞の癌化に伴い細胞表面の糖鎖構造に異常をきたすことが知られている。癌化に伴う糖鎖異常を的確にとらえる単クローン抗体は癌の診断や治療などの臨床面で極めて有用である。本研究者らは特に糖蛋白質糖鎖に対する単クローン抗体の作成法を開発し、数多くの抗体を得た。今回ヌードマウスに担癌させたLS180を免疫原として新たに11種の単クローン抗体の作成に成功した。この中の1つ、MLS128はLS180のムチン型糖ペプチドと反応するが、血清型糖ペプチドや糖脂質とは反応しない。また本抗体は以前当研究室で作成した癌関連糖鎖抗原を認識する単クローン抗体MLS102と同様、羊顎下腺ムチン(OSM)と強く反応した。しかし、シアリダーゼにより、抗体結合性は影響をうけないことから本抗体はMLS102と異なるエピトープを認識していると考えられた。またα-N-アセチルガラクトサミニダーゼやプロナーゼによりOSMとの反応性が著しく低下することから本抗体のエピトープには糖とペプチドの両方が関与することが予想された。さらに詳細なエピトープの構造を知るためアシアロOSMから抗体と結合するフラグメントをMLS128-アフィニティカラムとHPLCを用いて単離した。本抗体と結合する最小のフラグメントはサーモリシン消化により単離されたGP-2で、そのアミノ酸配列は、Leu-X-Glu-X-X-X-Gln-Leu-Proと決定された。これは以前Hillらが報告したOSMのアポムチンのトリプシン消化物、Tlフラグメントの一部であった。Xの位置はSerまたはThrにGalNAcの残基がα結合していると考えられ、特に3箇所連続してGalNAc残基がペプチド鎖上に並ぶ構造がML S128との結合に重要な部分であることが推定された。Tn赤血球のグリコホリンAは本抗体と反応するが、そのN末付近には、GP-2と類似の構造が存在する。

众所周知，当细胞癌变时，细胞表面的糖链结构就会变得异常。准确检测与癌变相关的糖链异常的单克隆抗体在癌症诊断和治疗等临床方面非常有用。研究人员开发了一种生产特异性针对糖蛋白糖链的单克隆抗体的方法，并获得了大量的抗体。这次，我们利用裸鼠荷瘤LS180作为免疫原，成功制备了11种新的单克隆抗体。其中之一，MLS128，与LS180的粘蛋白型糖肽反应，但不与血清型糖肽或糖脂反应。此外，该抗体与绵羊颌下粘蛋白（OSM）发生强烈反应，类似于我们实验室之前创建的单克隆抗体MLS102，MLS102可识别与癌症相关的碳水化合物抗原。然而，由于抗体结合特性不受唾液酸酶影响，因此认为该抗体识别与MLS102不同的表位。此外，由于α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶和链霉蛋白酶显着降低了与OSM的反应性，因此预测该抗体的表位中涉及糖和肽。为了获得更详细的表位结构，使用 MLS128 亲和柱和 HPLC 从 Asialo OSM 中分离出与抗体结合的片段。与该抗体结合的最小片段是通过嗜热菌蛋白酶消化分离的GP-2，其氨基酸序列确定为Leu-X-Glu-X-X-X-Gln-Leu-Pro。这是 T1 片段的一部分，是 OSM 载脂蛋白的胰蛋白酶消化物，Hill 等人之前报道过。据认为，GalNAc残基在X位置与Ser或Thrα-连接，特别是，在肽链上排列三个连续的GalNAc残基的结构是与ML S128结合的重要部分。事实就是如此。 Tn红细胞的血型糖蛋白A与该抗体发生反应，在其N末端附近存在与GP-2类似的结构。