細胞増殖を支配する情報伝達系ーGTP結合蛋白質の関与を中心にー

控制细胞增殖的信息转导系统 - 关注GTP结合蛋白的参与 -

基本信息

批准号：
62440081
负责人：
宇井理生
金额：
$ 12.8万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (A)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至 1989
项目状态：
已结题

项目摘要

近年, 様々な情報伝達系において百日咳毒素(IAP)による修飾を受け阻害されるGTP結合蛋白質(G蛋白質)の関与が明らかにされてきた. 本研究の目的は細胞増殖のようなゆっくりした応答を引起こす情報伝達機構におけるG蛋白質の役割を明らかにすることである. 今年度は, 主としてSwiss 3T3細胞の増殖誘導時におけるG蛋作質の役割について, DNA合成を指標に検討した.1.血清による増殖刺激はIAPにより有意に抑制され, その抑制は血清添加後9時間目にIAPを加えても, 0時間目に加えた場合と同じように起きることから, G蛋白質がG1期後半にも必要なことが明らかとなった. またIAP処理は3時間でも増殖阻害には十分であった.2.血清の代わりに種々の増殖因子を用いたところ, PDGF, ボンベシン, TPAはそれぞれ単独でDNA合成を誘導した. ボンベンシンによる誘導は, IAPにより抑制されたが, TPAによる誘導は抑制を受けず,両因子による増殖誘導の経路は異なることが明らかとなった.3.PDGFによる増殖誘導は, IAP感受性であったが, 刺激後9時間目にIAPを添加したときには抑制されず,血清やボンベシンによる刺激の場合と異なっていた. またPDGFとインスリンとを共存させるとIAP非感受性に変化した.4.DNA複製開始反応に対するIAPの影響を調べる目的で, ポリオーマウイルスDNAのin vitro複製系を確立した. 本複製系は, ウイルスの複製開始点を含むプラスミドDNA, 昆虫細胞発現ベクター系を用いて精製したウイルスのlarge T抗原, マウス細胞抽出液, それにATP産生系などにより構成されている. 反応産物の解析から, 半保存的な複製が2回以上おこなわれていることが判明した.

近年来，人们发现百日咳毒素（IAP）修饰和抑制的GTP结合蛋白（G蛋白）参与多种信号转导系统，今年我们主要关注G的作用。诱导 Swiss 3T3 细胞增殖的蛋白。作为指标研究了DNA合成1.IAP显着抑制了血清诱导的生长刺激，并且即使在添加血清后9小时添加IAP，也与0小时添加时相同地抑制了这些结果。表明G1期后期也需要G蛋白。此外，IAP处理3小时足以抑制生长2。当使用各种生长因子代替血清、PDGF、铃蟾肽时。每种TPA独立地诱导DNA合成。IAP抑制了铃苯肽的诱导，但TPA的诱导没有被抑制，这表明两种因子的生长诱导途径不同。 3.PDGF的增殖诱导对IAP敏感，但是。与血清或铃蟾肽刺激不同，刺激后 9 小时添加 IAP 并未抑制。此外，当PDGF和胰岛素共存时，病毒对IAP变得不敏感。 4.为了研究IAP对DNA复制起始反应的影响，建立了多瘤病毒DNA的体外复制系统，其由含有IAP的质粒DNA组成。复制起点、使用昆虫细胞表达载体系统纯化的病毒大T抗原、小鼠细胞提取物和ATP生产系统从反应产物的分析，结果发现，半保守复制发生了不止一次。