異種間キメラ動物を用いた大脳皮質-線条体投射路成立機構の解析

跨物种嵌合动物大脑皮层-纹状体投射路径建立机制分析

基本信息

批准号：
62121003
负责人：
青山裕彦
金额：
$ 0.96万
依托单位：
福井医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

中枢神経系で一定の投射経路が成立するとき, あるニューロンは, その軸索を遠く離れたところにある標的細胞に向かって伸ばすのだろうか, それとも標的細胞は発生の初期にはニューロンの近傍にありそのときに両者の結合が成立し, その後の発生により両者が離れていくのだろうか? このことを明らかにするため, ニワトリ胚の神経原基の微小部分をウズラ胚のそれで置換し, このキメラ胚において, 移植神経原基の発生を追跡しようと計画した. この目的のため, ウズラ細胞の, 突起をもふくむ細胞質や細胞膜と特異的に結合できる抗体を作製した.1.ウズラ細胞特異的ニワトリ抗血清: 7日ウズラ胚のホモジェネートから細胞膜の粗分画を得, これでニワトリを感作する. 25日間隔で2回感作し, その後5日目に採血, 血清を得る. ニワトリ胚組織で吸収したのち, ビオチン化-抗ニワトリ抗体を用いた間接免疫組織化学により, ニワトリ胚, ウズラ胚, およびニワトリーウズラキメラ胚のパラフィン切片上のウズラ細胞を検出する. ニワトリ胚はほとんど染まらないのに対して, ウズラ胚では神経系を含むすべての組織が染色された. キメラ胚では, ウズラ体節由来の細胞が染め出された. これは, その核小体の形態からも確認された. しかし, 8日胚以前のウズラ胚には, この抗体は結合しなかった.2.ウズラ細胞特異的マウスモノクローナル抗体: 1.と同じ抗原を用いてBalb/Cマウスを感作し, その脾細胞を用いてハイブリドーマを得, ニワトリ胚とウズラ胚のパラフィン切片を用いてウズラ細胞特異的モノクローナル抗体を産生するクローンを得た. この抗体は, 脊髄の前索を上行する神経線維と結合する. この抗体も8日以前の胚とは結合しない. 今後, より若いウズラ胚組織と結合する抗体を得る必要がある.

当中枢神经系统建立一定的投射路径时，神经元的轴突是否会向远处的目标细胞延伸，或者目标细胞是否在发育早期靠近神经元生长，两者之间是否有可能存在某种联系？在那一刻形成，并在随后的发育过程中分离？为了澄清这一点，我们用鹌鹑胚胎的神经原基替换了鸡胚胎的一小部分神经原基，在嵌合胚胎中，我们计划追踪移植神经原基的发育，为此，我们创建了能够特异性结合鹌鹑细胞的细胞质和细胞膜（包括突起）的抗体。 1. 鹌鹑细胞特异性鸡抗血清：细胞的粗馏分。膜取自7日龄鹌鹑胚胎匀浆，用于使鸡致敏，每隔25天致敏两次，然后在第5天采血以获得血清。在鸡胚胎组织中吸收后，使用生物素化的抗鸡抗体进行间接免疫组织化学检测鸡胚胎、鹌鹑胚胎和鸡-鹌鹑嵌合体胚胎的石蜡切片上的鹌鹑细胞，相反，在鹌鹑胚胎中，检测所有组织，包括神经系统。在嵌合胚胎中，来自鹌鹑体节的细胞被染色。从核仁的形态也证实了，但该抗体在第8天之前没有与鹌鹑胚胎结合。 2. 鹌鹑细胞特异性小鼠单克隆抗体：使用与1. Balb/C小鼠相同的抗原，他们的脾细胞被用来获得杂交瘤，鸡和鹌鹑胚胎的石蜡切片被用来获得产生鹌鹑细胞特异性单克隆抗体的克隆。它与脊髓前部的神经纤维结合，这种抗体也不与 8 天以上的胚胎结合。将来，我们需要获得与较年轻的鹌鹑胚胎组织结合的抗体。