本態性高脂血症の成因,特に脂質水解酵素と関連因子の変異に関する分子遺伝学的研究

原发性高脂血症病因尤其是脂质水解酶突变及相关因素的分子遗传学研究

基本信息

批准号：
61219028
负责人：
山本章
金额：
$ 0.83万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本態性高脂血症の成因を分子生物学および遺伝子のレベルから解明することを目標として血漿リポ蛋白代謝に関連する諸因子の異常を追求している。今回は特にトリグリセライドrichリポ蛋白(カイロマイクロンとVLDL)の代謝の第一段階を触媒する脂質水解酵素リポ蛋白リパーゼの分離、精製、酵素学的諸性質の同定を行い、本酵素に対する特異的抗体を作製し、この抗体を利用することによって本酵素と分泌する細胞内での合成過程をしらべ、I型高リポ蛋白血症における酵素活性欠損の原因を明らかにすることを試みた。リポ蛋白リパーゼおよびその類縁酵素である肝臓のトリグリセライドリパーゼは心臓手術の際の循環血の余分(ヘパリン注入後血漿)より、ヘパリンセファロース,ヒドロキシルアパタイト、およびゲル濾過によってSDS電気泳動で単一となる迄分離、精製した。これを抗原としてマウスに免疫し特異抗体を作成した。リポ蛋白リパーゼを分泌する細胞種として今回はヒト末梢血からモノサイトを分離、ヒト血漿(10%)加RPMI1640培地で約8日間培養し、マイクロファージとして使用した。【^(35)S】メチオニンにて一定時間細胞をパルス標識後、培養液と細胞を分離し、蛋白を可溶化した後、特異的抗体を加えて4℃で12時間インキュベートし、複合体を得て洗浄後、可溶化してSDS-PAGEで分析した。リポ蛋白リパーゼの分子量は61Kd、肝のトリグリセライドリパーゼは65Kdであった。【^(35)S】メチオニン標識による追求の結果、リポ蛋白リパーゼは細胞の小胞体で55Kdの蛋白として合成された後、プロセシングを受けて活性のある60Kdの蛋白になり、さらに61Kdとなって分泌される。I型高リポ蛋白血症の一症例においてはこの酵素はマクロファージ内では全く合成されておらず、また他の一例では一応の合成が行われているのに活性が欠除していることがわかった。

为了从分子生物学和基因水平阐明基本高脂血症的起源，我们正在追求与血浆脂蛋白代谢有关的因素异常。在本文中，我们特异性地分离，纯化和鉴定了脂质水解酶脂蛋白脂肪酶的酶促特性，从而催化甘油三酸酯富脂蛋白的代谢的第一阶段（cylomiccron and vldl），以通过这种特定的抗体分泌，并在本中进行分泌，并将其抗体分泌。抗体，并阐明I型高脂血症中酶活性缺乏的原因。将脂蛋白脂肪酶及其相关酶，肝甘油三酸酯脂肪酶分离，并在心脏手术期间通过肝素丝糖果，羟基磷灰石和凝胶过滤在心脏手术期间从多余的循环血液（肝素注射后血浆）纯化至单一水平。这被用作免疫小鼠以产生特定抗体的抗原。这次，将单核细胞从人外周血分离为分泌脂蛋白脂肪酶的细胞类型，并在人血浆中培养（10％）RPMI1640培养基约8天，并用作微生物。 [^（35）s]用蛋氨酸脉冲标记在一定时间段内，将培养基和细胞分离，溶解蛋白，并添加蛋白质，并在4°C下添加特异性抗体，并在4°C下孵育12小时，将复合物获得，洗涤，然后洗涤，然后通过SDS-PAGE溶解并溶解并分析。脂蛋白脂肪酶的分子量为61 kD，肝甘油三酸酯脂肪酶为65 kd。 [^（35）S]由于追求蛋氨酸标记，脂蛋白脂肪酶在细胞的内质网中被合成为55KD蛋白，然后被加工为活性60KD蛋白，并被分泌为61kD。在一种I型高脂蛋白血症的一种情况下，该酶在巨噬细胞中根本没有合成，在另一种情况下，发现尽管具有Prima Facie Connathesis，其活性仍缺乏活性。