エクソソーム表面抗原を利用した核酸医薬の細胞内送達法の開発

利用外泌体表面抗原开发核酸药物的细胞内递送方法

基本信息

批准号：
22KJ2502
负责人：
大山将大
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

今年度はアビジン-ビオチン相互作用をリンカー構造に取り入れたエクソソーム随伴型抗体結合型核酸（以降、EPEIOS）を設計し、主に分子構造の最適化とin vitro系有効性評価を行った。(a) EPEIOSの合成条件検討：本システムを構成する3種類の分子（ビオチン標識抗体、ストレプトアビジン、ビオチン標識核酸）の組成や反応条件を種々検討した。複合体形成能をゲルシフトアッセイによって評価したところ、ビオチン標識抗体：ストレプトアビジン：ビオチン標識核酸＝１：２：１の比率で反応させた条件において高効率でEPEIOSを形成可能であることを見出した。(b) EPEIOSの細胞内取込効率評価：標的microRNAに相補的な配列を有するアンチセンス核酸（anti-miR核酸）に蛍光標識を施しEPEIOSに搭載した。共焦点レーザー顕微鏡を用いてEPEIOSの肺がん細胞内取込効率を評価したところ、従来型のエクソソーム随伴型薬物送達システム（ExomiR-Tracker）と比較して高い細胞内送達が確認された。(c) EPEIOSの細胞内活性評価：肺がん細胞においてanti-miR核酸搭載EPEIOSによる標的microRNAの機能阻害効果をデュアルルシフェラーゼレポーターアッセイにより評価したところ、EPEIOS処理群で従来型のExomiR-Trackerをはるかに上回る機能阻害効果が確認された。なお、予備検討ではあるが、EPEIOSの担癌マウスにおける臓器分布について比較的良好な結果が得られているため、次年度は引き続きin vivo系の有効性評価を進める予定である。

今年，我们设计了与外泌体相关抗体偶联的核酸（以下称为EPEIOS），该核酸（以下称为EPEIOS）将抗生物素生物素相互作用融合到接头结构中，并主要优化了分子结构并评估了体外系统的有效性。（a）研究了构成该系统的三个分子的各种组成和反应条件的研究（生物素标记的抗体，链霉亲蛋白和生物素标记的核酸）。当通过凝胶偏移测定法评估复合形成能力时，发现在生物素标记的抗体的比例为1：2：1的情况下，可以以高效率形成EPEIOS：链霉亲蛋白：生物素标记的核酸。（b）评估EPEIOS的细胞摄取效率：与靶MicroRNA互补的序列的反义核酸（抗MIR核酸）进行荧光标记并安装在Epeios上。使用共聚焦激光显微镜评估肺癌在EPEIO的细胞内摄取效率比传统的外泌体相关药物输送系统（Exomir-Tracker）证实，细胞内递送更高。（c）对EPEIO的细胞内活性评估：当使用双重荧光素酶报道测定器评估了抗MIR核酸核酸核酸对肺癌细胞中靶向microRNA的功能抑制作用时，人们确认，EPEIOS治疗的组具有比常规Exomir-tracker-tracker-tracker-tracker-tracker-tracker效应。尽管这是一项初步研究，但对于具有EPEIOS的肿瘤性小鼠的器官分布，已经获得了相对良好的结果，我们计划继续评估明年体内体内系统的功效。