分子進化的手法による高性能な蛍光免疫センサーQuenchbody構築法の確立

利用分子进化方法建立高性能荧光免疫传感器Quenchbody构建方法

基本信息

批准号：
22KJ1271
负责人：
井上暁人
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

1. 酵母提示抗体ライブラリを用いた高性能なQ-body選択研究協力者である徳島大学村上博士より分与を受けた30種余りのヒト血清アルブミン結合ナノ抗体を材料に，これらをコイルドコイル形成ペプチドE4と融合して酵母細胞表面で提示させ，外部からFITC-TAMRA標識コイルドコイル形成ペプチドK4を付加してQ-body化し，抗原応答の高いQ-bodyを選択した。この結果得られた，抗原依存的蛍光応答の高いクローンは，大腸菌で発現させてQ-body化しても他のクローンより高い応答を示した。さらに酵母表面やビーズ上で蛍光応答が向上することが新たにわかり、これらの本研究成果をまとめて論文発表を行った(Sci. Rep.)。2. ランダムなトリプトファン残基挿入によるQ-body応答の向上1で選択されたナノ抗体をテンプレートとし、その超可変領域(CDR)のチロシン残基にトリプトファン残基をランダムに導入したライブラリから抗原結合能を示し、かつクエンチを示すナノ抗体を選択した。その結果、複数のトリプトファン残基を含む変異体が獲得された。さらに選択された変異体を大腸菌で発現させ、蛍光応答を見ると抗原結合を損なうことなく、より高い応答を示すことが確認され、本手法を用いてナノ抗体を材料としたQ-bodyを分子進化させることに成功した。3. 低分子認識VHHのQ-body応答の向上低分子認識ナノ抗体としてはコルチゾールを認識するナノ抗体を新たなモデルとし、立体構造をもとにCDR1にトリプトファン残基の変異を導入した。その結果、野生型と比べて約2倍の蛍光応答を示すことが確認され、低分子認識ナノ抗体についても分子進化が可能であることが示唆された。

1。由穆拉卡米博士分发的30多个人血清白蛋白偶联的纳米抗体，他是使用酵母菌呈递抗体库的高性能Q体选择研究的合作者，它们被用作材料，这些抗体库是材料，这些抗体与串联的形成型肽E4融合在一起，以呈现在Yeast Yeast Cell的表面上。 Q体是通过从外部添加FITC-TAMRA标记的盘绕胶体K4的Q体制成的，选择具有高抗原反应的Q体。在大肠杆菌中表达和Q型时，具有高抗原依赖性荧光反应的最高抗原依赖性荧光反应的克隆显示出比其他克隆的反应更高。此外，新发现的是，在酵母和珠子的表面上改善了荧光反应，并总结了这项研究的结果并发表了一篇论文（Sci。Rep。）。 2。将随机色氨酸残基插入的Q体反应改善用作模板，并从库中选择了具有抗原结合能力和淬灭能力的纳米抗体，其中从库中随机将色氨酸残基被随机引入到高变化区域的酪氨酸残基（CDR）（CDR）。结果，获取了含有多种色氨酸残基的突变体。此外，选定的突变体在大肠杆菌中表达，当观察荧光反应时，它证实它显示出较高的响应而不会损害抗原结合，并且使用这种技术，将Q-boty使用纳米抗体作为材料作为材料进行了分子进化。 3。小分子识别VHH的Q体反应的改善，我们使用了一种识别皮质醇的纳米抗体模型，而基于三维结构将色氨酸残基的突变引入了CDR1中。结果证实，它的荧光反应约为野生型的两倍，表明小分子识别纳米抗体也能够进行分子进化。