次世代のDDS開発を志向したエクソソームターゲティングシステムの効率的探索

有效寻找旨在开发下一代 DDS 的外泌体靶向系统

• 批准号: 22KJ0645
• 负责人: 國武 厚貴
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0645/
• 关键词: 細胞外小胞; エクソソーム; Small EV; DDS; CRISPR screen

バーコード化small EVライブラリーを用い，特定のマーカータンパク質を発現するsmall EVのサブポピュレーションの放出に特異的にかかわる遺伝子のスクリーニングを行った．スクリーニング結果を用いたパスウェイ解析により，CD63を発現するsmall EVとCD9を発現するsmall EVでは，細胞内での生合成過程が異なっていることを強く示すデータを得た．とくにCD63発現small EVの放出はリソソーム機能やミトコンドリア機能に強い影響を受けることが判明した．この知見を利用し，リソソームやミトコンドリアの機能阻害を起こす小分子を利用することでCD9発現small EVの放出量を大きくは変えないままにCD63発現small EVの放出量を増減させることが可能であることを発見した．これまでのスクリーニング技術ではこのようなsmall EVのサブポピュレーションごとに網羅的遺伝子スクリーニングを行うことは困難であり，本発見は開発したsmall EVのバーコード化技術とそれを用いたスクリーニング技術の有用性を強く示す結果であるといえる．生体内では様々な種類の細胞が様々な 機能をもったsmall EVを放出しており，恒常性の維持や逆に病態の進展に寄与していることがわかっている．本技術の活用によってこのようなsmall EVごとの機能，生合成過程の理解が進めばこれまで未解明であった疾患の理解，さらには治療法の開発へとつながることが期待できる．

使用带条形码的小型 EV 文库，我们筛选了专门参与表达特定标记蛋白的小型 EV 亚群释放的基因。通过使用筛选结果的通路分析，我们获得的数据强烈表明表达CD63的小EV和表达CD9的小EV的细胞内生物合成过程是不同的。特别是，发现表达 CD63 的小 EV 的释放受到溶酶体和线粒体功能的强烈影响。我发现，利用这些知识，可以增加或减少表达 CD63 的小 EV 的释放量，而不会显着改变通过使用抑制溶酶体和线粒体功能的小分子释放的表达 CD9 的小 EV 的量。使用传统的筛查技术很难对小型 EV 的每个亚群进行全面的基因筛查，这一发现证明了所开发的小型 EV 条形码技术以及使用该技术的筛查技术的有用性。该结果强烈表明了性别。在体内，各种类型的细胞释放具有各种功能的小EV，已知它们有助于维持体内平衡，反之亦然，有助于病理状况的进展。通过利用这项技术，我们有望加深对每个小型 EV 的功能和生物合成过程的了解，从而了解以前未知的疾病并开发治疗方法。

项目成果

RNAバーコードを用いた細胞外小胞放出制御因子の網羅的探索

使用 RNA 条形码全面搜索细胞外囊泡释放调节剂

• 发表时间: 2022
• 作者: 〇國武厚貴，小嶋良輔，水野忠快;浦野泰照
• 通讯作者: 浦野泰照

CRISPR-gRNAの利用による細胞外小胞放出制御因子の網羅的/サブポピュレーション特異的探索

使用 CRISPR-gRNA 全面/亚群特异性搜索细胞外囊泡释放调节因子

• 发表时间: 2022
• 作者: 國武 厚貴