DNA barcoding technology for tracking cell lineage of multinucleated osteoclasts

DNA条形码技术用于追踪多核破骨细胞的细胞谱系

基本信息

  • 批准号：
    22K19289
  • 负责人：
    箭原 康人
  • 金额：
    $ 4.16万
  • 依托单位：
    Osaka University
  • 依托单位国家：
    日本
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
  • 财政年份：
    2022
  • 资助国家：
    日本
  • 起止时间：
    2022-06-30 至 2024-03-31
  • 项目状态：
    已结题

项目摘要

本研究は、遺伝子改変マウスを用いた細胞系譜技術と遺伝子バーコード技術を組み合わせることで、破骨前駆細胞が分化・融合する過程を詳細に観察・追跡する基盤技術を創出することを目的とした。性質の異なる複数の前駆細胞が融合を繰り返しながら、1つの破骨細胞を形成する過程を詳細に追跡することで、多核細胞形成ダイナミクスの基本原理の解明を目指している。初年度は、遺伝子発現プロファイルが異なる2つの破骨前駆細胞集団を独立して追跡可能な細胞系譜マウスの作成に成功した。さらに、遺伝子バーコードによる多核融合細胞の細胞系譜技術を構築するため、ガイドRNAとその標的となる分子バーコードを発現するノックインマウスを入手した。現在は、破骨細胞において薬剤誘導性にCas9蛋白を強制発現するマウスラインの樹立を目指している。破骨前駆細胞において、Cas9蛋白、ガイドRNAと遺伝子バーコードが共存することで、遺伝子バーコードに変異を導入し、多核破骨細胞の形成過程を一細胞レベルで追跡可能な実験系の確立に取り組んでいる。
本研究的目的是利用转基因小鼠的细胞谱系技术和基因条形码技术相结合，创建一种密切观察和追踪破骨细胞前体细胞分化和融合过程的基础技术。通过密切跟踪具有不同特性的多个祖细胞重复融合形成单个破骨细胞的过程，我们的目标是阐明多核细胞形成动力学的基本原理。第一年，我们成功创建了细胞谱系小鼠，可以独立追踪具有不同基因表达谱的两个破骨细胞前体细胞群。此外，为了建立使用遗传条形码的多核融合细胞的细胞谱系技术，我们获得了表达指导RNA及其目标分子条形码的敲入小鼠。目前，我们的目标是建立一种通过药物诱导的方式在破骨细胞中强制表达Cas9蛋白的小鼠品系。 Cas9蛋白、向导RNA和基因条形码在破骨细胞前体细胞中的共存使我们能够在基因条形码中引入突变，并建立一个实验系统，使我们能够在单细胞水平上追踪多核破骨细胞的形成过程。正在努力。

项目成果

期刊论文数量（4）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
骨髄造血幹細胞および胎児卵黄嚢由来破骨細胞による骨恒常性維持メカニズムの解明
阐明骨髓造血干细胞和胎儿卵黄囊源性破骨细胞维持骨稳态的机制
  • DOI：
  • 发表时间：
    2022
  • 期刊：
  • 影响因子：
    0
  • 作者：
    Yahara Yasuhito;Nguyen Tuyet;Ishikawa Koji;Kamei Katsuhiko;Alman Benjamin A.;箭原康人;箭原康人
  • 通讯作者：
    箭原康人
骨髄腔はどのようにしてできるのか？　 破骨細胞の起源多様性から紐解く長幹骨発生のダイナミクス
骨髓腔是如何形成的？
  • DOI：
  • 发表时间：
    2022
  • 期刊：
  • 影响因子：
    0
  • 作者：
    Yahara Yasuhito;Nguyen Tuyet;Ishikawa Koji;Kamei Katsuhiko;Alman Benjamin A.;箭原康人;箭原康人;箭原康人
  • 通讯作者：
    箭原康人
The origins and roles of osteoclasts in bone development, homeostasis and repair
  • DOI：
    10.1242/dev.199908
  • 发表时间：
    2022-04-01
  • 期刊：
    DEVELOPMENT
  • 影响因子：
    4.6
  • 作者：
    Yahara, Yasuhito;Nguyen, Tuyet;Alman, Benjamin A.
  • 通讯作者：
    Alman, Benjamin A.
細胞融合と骨吸収 　破骨細胞の多様性構築と骨髄腔発生メカニズムの統合的理解
细胞融合与骨吸收：破骨细胞多样性构建与骨髓腔发育机制的综合认识
  • DOI：
  • 发表时间：
    2023
  • 期刊：
  • 影响因子：
    0
  • 作者：
    Yahara Yasuhito;Nguyen Tuyet;Ishikawa Koji;Kamei Katsuhiko;Alman Benjamin A.;箭原康人
  • 通讯作者：
    箭原康人
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  • 通讯作者：
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    2020
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    箭原 康人;川口 善治
  • 通讯作者：
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