DNA修復蛋白質53BP1によるCD47クラスター形成とがん細胞貪食機構の解明

DNA修复蛋白53BP1阐明CD47簇形成和癌细胞吞噬机制

基本信息

批准号：
22K12381
负责人：
砂谷優実
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kanazawa Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K12381/
关键词：
アポトーシス

项目摘要

細胞表層にびまん性に存在するCD47は、アポトーシス時には細胞表層の脂質ラフト層でクラスターを形成し限局化する。これにより、CD47はその受容体であるSIRPaと解離し、CD47の貪食阻害効果が解除され、細胞表層に出現したeat-me signalが食細胞の貪食受容体により認識されるようになると考えられている。研究代表者はこれまでに、DNA修復タンパク質53BP1がアポトーシス時にカスパーゼに切断されてC末端領域からなる断片となること、53BP1を欠損したアポトーシス細胞ではCD47のクラスター形成が減少していることを見出した。本研究では、53BP1C末断片化依存性にCD47のクラスター形成が誘導されることをきっかけとして、食細胞がアポトーシス細胞を貪食除去できるようになるのではないかというモデルを立案した。このモデルを立証するため、以下に示す3つの現象の53BP1C末断片化依存性の有無を検証し、53BP1C末断片に含まれる機能ドメインを明らかにしようと試みている。A. CD47のクラスター形成B. CD47とSIRPaの結合解離C. 食細胞によるアポトーシス細胞貪食令和4年度は、解析に使用する機能ドメイン変異型53BP1C末断片安定発現細胞株の樹立に取り組み、BRCTドメイン以外の既知ドメイン変異型53BP1C末断片発現細胞株を樹立した。そして、CD47のクラスター形成が53BP1C末断片化依存性であることを明らかにした。

CD47广泛存在于细胞表面，在细胞凋亡过程中通过在细胞表面的脂筏层中形成簇而定位。结果，CD47与其受体SIRPa解离，CD47的吞噬抑制作用被释放，并且细胞表面出现的“吃我”信号被认为被吞噬细胞的吞噬受体识别。主要研究人员此前发现，DNA修复蛋白53BP1在细胞凋亡过程中被半胱天冬酶切割成由C端区域组成的片段，并且在缺乏53BP1的凋亡细胞中CD47簇的形成减少。在本研究中，我们提出了一种模型，其中吞噬细胞能够通过 53BP1C 末端片段化依赖性诱导 CD47 簇形成来吞噬并去除凋亡细胞。为了证明这个模型，我们试图验证以下三种现象对53BP1C末端片段化的依赖性，并阐明53BP1C末端片段中包含的功能域。 A. CD47 的簇形成 B. CD47 和 SIRPa 的结合和解离 C. 吞噬细胞的凋亡细胞吞噬作用在 2020 财年，我们致力于建立稳定表达功能域突变体 53BP1C 末端片段的细胞系，用于分析 A 细胞。建立了表达 53BP1（一种已知结构域变体）C 端片段的细胞系。我们还发现 CD47 簇的形成依赖于 53BP1 C 端片段化。