アンジオテンシンによる脳血管老化機序の解明と認知症治療への展開

血管紧张素诱导脑血管衰老机制的阐明及其在痴呆治疗中的进展

• 批准号: 22K11829
• 负责人: 閔 莉娟
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K11829/
• 关键词: 脳血管細胞; 脳血管老化; 認知機能; アルツハイマー病; シャペロン介在性オートファジー; LAMP-2A; 認知機能低下; 脳血管老化・保護; アミロイドβ蓄積; オートファジー; レニン・アンジオテンシン系

[目的]　①アンジオテンシン（Ang）II刺激が脳血管細胞を老化させ、認知機能を低下させることを個体レベルで実証する。②AngIIが脳血管老化を促進するメカニズムをシャペロン介在性オートファジー（CMA）に着目して明らかにする。③AngII-CMA-脳血管老化-認知機能低下の関係を明らかにする。[方法] マイクロ浸透圧ポンプでAngIIを脳室内投与したC57BL/6Jマウスからの脳血管とAngII連日刺激した脳血管平滑筋細胞（BVSMC）を用い、老化関連βガラクトシダーゼ(SA-β-gal)染色により脳血管細胞老化を評価した。老化関連因子p53やp16などCDKIの発現、CMA経路関係因子LAMP-2A、Hsc70、Hsp90、CHIPなどの発現はAngII連日刺激したBVSMCのライセ―トを用い、ウェスタンブロッティング法にて測定した。また、LAMP-2Aの老化における役割を明らかにするため、LAMP-2Aのコンストラクトを作製してきた。[結果] AngIIの脳室内投与マウスの脳血管のSA-β-gal染色実験は一回だけ行ったため、明らかに証明できるデータを得なかったが、AngIIで連日刺激によりBVSMCの老化細胞数とp53、p21、p27、p16などCDKIの発現は増加することが認められた。また、BVSMCへのAngII刺激によりCMA経路関係因子の中、LAMP-2Aだけの発現は減少することが認められた。遺伝子LAMP-2A、タグFLAGを含むpcDNA3.1(+)組み換えプラスミドを精製でき、BVSMCにトランスフェクションしてLAMP-2Aの高発現が確認された。これから、得た組み換えプラスミドを用いてLAMP-2Aの老化作用を明らかにする。[結論] AngIIがCDKIを介して脳血管細胞を老化させる可能性が示唆された。そのメカニズムにはCMA経路関係因子であるLAMP-2Aが深く関与している可能性も示唆された。

【目的】①在个体水平证明血管紧张素（Ang）II刺激会导致脑血管细胞老化并降低认知功能。 ②我们将阐明AngII促进脑血管衰老的机制，重点关注分子伴侣介导的自噬（CMA）。 ③阐明AngII-CMA-脑血管衰老-认知功能下降的关系。 [方法] 使用 C57BL/6J 小鼠的脑血管进行衰老相关 β-半乳糖苷酶 (SA-β-gal) 染色，其中使用微渗透泵向脑室内注射 AngII，并每天刺激脑血管平滑肌细胞 (BVSMC)用AngII评估脑血管细胞老化。使用每天用 AngII 刺激的 BVSMC 裂解物通过蛋白质印迹法测量 CDKI 的表达，例如衰老相关因子 p53 和 p16，以及 CMA 途径相关因子 LAMP-2A、Hsc70、Hsp90 和 CHIP 的表达。此外，为了阐明 LAMP-2A 在衰老中的作用，我们创建了 LAMP-2A 构建体。 [结果]脑室注射A​​ngII的小鼠脑血管SA-β-gal染色实验仅进行了一次，无法获得明确的数据，观察到CDKIs如p21、p27的表达情况。 ，p16 增加。此外，观察到在CMA途径相关因子中，只有LAMP-2A的表达通过AngII刺激BVSMC而降低。成功纯化含有LAMP-2A基因和标签FLAG的pcDNA3.1(+)重组质粒，转染BVSMC证实LAMP-2A高表达。今后，我们将利用获得的重组质粒来阐明LAMP-2A的老化作用。 [结论]AngII可能通过CDKI导致脑血管细胞衰老。也有人提出，CMA 通路相关因子 LAMP-2A 可能深入参与了这一机制。

项目成果

愛媛大学大学院医学系研究科 医化学・細胞生物学 研究紹介

爱媛大学医学研究科医学化学/细胞生物学研究介绍