血中リン調節因子Galnt3、Fgf23遺伝子発現を制御するエンハンサーの同定

控制血磷调节剂 Galnt3 和 Fgf23 基因表达的增强子的鉴定

• 批准号: 22K11805
• 负责人: 坂根 千春
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K11805/
• 关键词: Runx2; Galnt3; Fgf23; エンハンサー; 血中リン濃度制御

この研究では、血中のリン濃度を調節しているホルモンFGF23(遺伝子名Fgf23)と、その活性を維持している酵素GalNAc-T3(遺伝子名Galnt3)の発現が、どのように制御されているかを調べる。FGF23は主に骨から産生され、骨形成に必須の転写因子Runx2を介して発現調節されている可能性がある。また、Runx2が転写調節する遺伝子をマイクロアレイで網羅的に検索した結果、Galnt3がRunx2によって骨芽細胞でも発現誘導された。このとき、Fgf23は骨芽細胞でも強く発現していた。したがって、Galnt3がFGF23の活性を維持する経路で、Runx2がGalnt3の発現を誘導し、血中リン濃度の調節に関与している可能性が考えられた。そこで、Runx2の結合領域を目印にエンハンサーを探索し、in vivo実験によってGalnt3およびFgf23の生理的発現に必要なエンハンサーを決定する。はじめに、9週齢のマウス大腿骨および脛骨から分画した骨芽細胞画分と骨細胞画分を用いて、real-time RT-PCR法により、Runx2とGalnt3およびFgf23の発現を調べた。Runx2とGalnt3は骨芽細胞画分で強く発現しており、Fgf23は骨細胞画分で強く発現していた。つぎに、初代培養したマウス骨芽細胞を用いたRunx2抗体によるChIPシークエンスおよびATACシークエンスによるオープンクロマチン領域検出の結果と、データベース上の種間の塩基配列ホモロジーから、Galnt3のエンハンサー候補を選定した。

在这项研究中，如何调节血液中的LIN浓度和酶Galnac-T3（遗传名称GALNT3）的激素FGF23的表达（遗传​​名称FGF23）。 FGF23主要是由骨骼产生的，可能已经通过转录因子Runx2进行了补偿，这对于骨形成至关重要。另外，由于全面搜索了Runx2调节转录的基因，因此在成骨细胞中，runx2也诱导了galnt3。目前，FGF23在无聊的细胞中强烈表达。因此，被认为GALNT3保持FGF23的活性，这可能诱导了GALNT3的表达，并参与了调节血液磷浓度。因此，runx2的结合区域作为地标探索了增强子，并且GALNT3和FGF23的生理表达所需的增强子由体内实验确定。最初，使用骨旋转细胞和骨细胞与九周的小鼠股骨和胫骨分开的骨细胞和骨细胞，通过实时RT-PCR方法检查了Runx2，Galnt3和FGF23的表达。 runx2和galnt3在骨母细胞中强烈表达，FGF23在骨细胞中强烈表达。接下来，使用第一代小鼠骨芽细胞和数据库中的ATAC序列检测和ATAC序列检测和基本序列同源物，从芯片序列的结果和开放染色质区域检测中选择了GALNT3的增强剂候选。