始原生殖細胞の形成、増殖、分化過程におけるポリコーム因子ＰＲＣ２の包括的機能解析

多梳因子PRC2在原始生殖细胞形成、增殖和分化过程中的综合功能分析

基本信息

批准号：
13J04473
负责人：
長岡創
金额：
$ 3万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J04473/
关键词：
生殖細胞減数分裂 ES細胞性分化始原生殖細胞卵子精子

项目摘要

始原生殖細胞（Primordial germ cells: PGCｓ）が性決定のシグナルを受けた後、卵母細胞へ分化する過程においてポリコーム抑制複合体が減数分裂誘導を制御するという報告を受け、減数分裂誘導機構の更なる解明を目指すべく、研究を進めている。本年度は遺伝子強制発現ベクターの改良により安定的に生殖細胞にて候補遺伝子を発現できる系の再構築、そして候補遺伝子を発現させることによる表現型の解析を行った。生殖細胞への分化の過程において、発現ベクターがサイレンシングを受けてしまうという結果を受けて、ベクターの改良のために、１）insulator sequenceの発現ベクターへの付与、２），候補遺伝子発現ベクターと、テトラサイクリン誘導用のrtTA遺伝子発現ベクターの分離、３）薬剤耐性遺伝子の変更及び、薬剤濃度の検討を行い、ES細胞を始原生殖細胞様細胞（PGC-like cells:PGCLCｓ）へと分化させた後も、発現を維持できる最適な条件を見つけだした。発現ベクターの改良に伴い、新たにES細胞株を樹立し、PGCLCｓにて候補遺伝子群の発現を行い、FACS、免疫染色、qRT-PCRによる表現型解析を行ったところ、候補遺伝子群の発現を行うと、PGCLCｓの分化が進み、減数分裂への移行を誘導することができた。具体的には生体内にて、生殖隆起へとPGCｓが移入した後に発現する遺伝子の発現上昇や、減数分裂特異的に発現される遺伝子の発現上昇、そして、減数分裂に特異的に起こる相同染色体の対合を誘導できることを確認した。その後、候補遺伝子群を絞り、減数分裂移行に決定的な働きをする遺伝子の同定に成功した。現在はRNA-seq, ChIP-seq, 遺伝子破壊を用いた多角的な解析を行い、論文作成へと仕上げている段階である。

在收到一份报告说，在原始生殖细胞（PGC）的过程中，多肉液抑制复合物调节了减数分裂诱导，并接受了性测定信号，然后分化为卵母细胞，正在进行研究以进一步阐明减数分裂诱导机制。今年，我们重建了一个可以通过改善强制表达载体来稳定表达生殖细胞中候选基因的系统，并通过表达候选基因来分析表型。为了响应在分化生殖细胞过程中表达载体被沉默的结果，以改善载体，1）将绝缘体序列分配给表达载体，2）2）分隔候选基因基因表达载体和RTTA基因表达载体以进行四环素诱导，以使燃料的浓度和研究允许在耐药性的情况下，以至于允许在耐药的情况下，以使其在耐药性中脱颖而出。原始生殖细胞样细胞（PGC样细胞：PGCLC）。随着表达载体的改善，建立了新的ES细胞系，使用PGCLCS表达候选基因组，并使用FACS，免疫染色和QRT-PCR进行表型分析。当表达候选基因组时，PGCLC被分化，并诱导了减数分裂的过渡。具体而言，已经证实，在体内可以诱导PGC转移到细菌升高后表达的基因表达的增加，特异性减数分裂表达的基因表达增加，以及在减数分裂中特别发生的同源染色体的配对。之后，候选基因被缩小范围，并成功鉴定出在减数分裂过渡中果断起的基因。目前，我们正在使用RNA-Seq，Chip-Seq和Gene Dispruption进行多方面分析，现在正在完成论文的准备。

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

多能性幹細胞を起点とした生殖細胞系譜の試験管内分化誘導.

从多能干细胞开始体外分化诱导生殖细胞谱系。

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
日本臨牀
影响因子：
0
作者：
長岡創;斎藤通紀
通讯作者：
斎藤通紀

Persistent requirement and alteration of the key targets of PRDM1 during primordial germ cell development in mice.

小鼠原始生殖细胞发育过程中 PRDM1 关键靶标的持续需求和改变。

DOI：
10.1095/biolreprod.115.133256
发表时间：
2015
期刊：
Biology of Reproduction
影响因子：
3.6
作者：
Yamashiro C;Hirota T;Kurimoto K;Nakamura T;Yabuta Y;Nagaoka SI;Ohta H;Yamamoto T;Saitou M.
通讯作者：
Saitou M.

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