アネキシン5遺伝子発現調節機構の解析

膜联蛋白5基因表达调控机制分析

基本信息

批准号：
08876057
负责人：
汾陽光盛
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08876057/
关键词：
アネキシン5 下垂体プロラクチンラット遺伝子発現 PCR

项目摘要

本研究計画は、新しいパラクリン/オートクリン因子と推定される、アネキシン5の遺伝子発現調節機序を解析し、アネキシン5が下垂体、卵巣における局所的な調節因子である可能性を追求したものである。今年度の実施結果は以下のように要約される。1. RT-PCR法を用いた、アネキシン5mRNAの定量アネキシン5のmRNA発現量を解析するために、RT-PCR法を利用した定量法を開発した。既に、内部標準とするG3PDHmRNAを同時に同一チューブ内で増幅するためのプライマーの設計、PCR条件の検討を終えた。この系を用いて下垂体、卵巣のアネキシン5mRNA量の変化を追跡中である。2. In situ hybridization法を用いた、アネキシン5産生細胞の同定アネキシン5が、下垂体、卵巣を初めとした数々の組織に存在することを見いだしている。しかし、これらの組織は複数の細胞種の混在する組織であり、アネキシン5は、産生細胞によって細胞外に供給されている。そこで、どの細胞種がアネキシン5を産生し、これを局所に供給しているかを知るため、in situ hybridization法を用いて、アネキシン5mRNAの組織内分布を明らかにし、免疫組織化学法から得られた知見と比較検討した。卵巣でまず実験を行い、黄体細胞の中でも大型の細胞にmRNAの出現することを明らかにした。3.アネキシン5の細胞作用の検討ホルモン分泌を指標としてアネキシン5の効果を検討中である。下垂体ホルモン(LHとプロラクチン)の時間分解免疫測定法を開発し、初代培養系で組換えアネキシン5、アンチセンスDNAの効果を検討中である。

该研究项目分析了膜联蛋白5（被认为是一种新的旁分泌/自分泌因子）的基因表达调控机制，并探讨了膜联蛋白5是垂体和卵巢局部调节因子的可能性。现将今年的实施成果总结如下。 1.使用RT-PCR对膜联蛋白5 mRNA进行定量为了分析膜联蛋白5 mRNA的表达水平，我们开发了一种使用RT-PCR的定量方法。我们已经设计了引物并检查了 PCR 条件，以在同一管中同时扩增作为内标的 G3PDH mRNA。使用该系统，我们目前正在追踪垂体和卵巢中膜联蛋白 5 mRNA 水平的变化。 2.使用原位杂交鉴定膜联蛋白5产生细胞已发现膜联蛋白5存在于许多组织中，包括垂体和卵巢。然而，这些组织含有多种细胞类型的混合物，膜联蛋白 5 由产生细胞在细胞外提供。因此，为了找出哪些细胞类型产生annexin 5并局部供应，我们采用原位杂交来阐明annexin 5 mRNA的组织分布，并与免疫组织化学的结果进行比较。他们首先在卵巢上进行实验，发现mRNA出现在黄体细胞中的大细胞中。 3. 检查膜联蛋白5 的细胞作用我们目前正在使用激素分泌作为指标来检查膜联蛋白5 的作用。我们开发了一种垂体激素（LH 和催乳素）的时间分辨免疫测定方法，目前正在研究重组膜联蛋白 5 和反义 DNA 在原代培养系统中的作用。