ニワトリ栓球由来細胞増殖因子の遺伝子解析

鸡血小板源性细胞生长因子的遗传分析

基本信息

批准号：
08760316
负责人：
堀内浩幸
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760316/
关键词：
ニワトリ栓球増殖因子

项目摘要

本研究では、ニワトリ栓球由来細胞増殖因子の遺伝子クローニングを目的に(1)細胞増殖活性を阻害する単クローン抗体の選抜(2)抗体スクリーニング法を用いた増殖因子遺伝子のクローニングを試みた。増殖因子を複数含有することが示唆されているニワトリ栓球無血清培養上清(TSP)を免疫原に作出した約400のマウスハイブリドーマクローンの培養上清を用いて、Vero細胞及びニワトリ胚線維芽細胞(CEF)に対するTSPの増殖活性阻害試験を行ったが、阻害活性を示すクローンの選抜はできなかった。TSP中には多種多様な増殖因子が存在するものと考えられ、1種類の増殖因子の活性を阻害しても全体の増殖活性の阻害を検出することが困難であると考えられた。そこで、TSPをゲル濾過により部分精製し、得られた分画の増殖活性をCEF及びVero細胞を用いて測定した。その結果、細胞種で異なる分画に増殖活性のピークが検出された。現在この分画を用い抗体による阻害活性を測定中であり、既に数種の阻害活性を有するクローンを選抜している。今後これらのクローンから得られる単クローン抗体を用いた抗体スクリーニングを計画している。また、既知の血小板由来増殖因子であるHGFおよびPDGFの遺伝子発現をこれらの増殖因子塩基配列をもとにPCRプライマーを合成し、栓球RNAを用いたRT-PCRを行った。その結果、HGFプライマーを用いたRT-PCRでは、HGF like proteinをコードする遺伝子断片2種とPDGFプライマーを用いた場合ではPDGFA鎖と相同性を持つ4種の遺伝子断片が得られた。今後、上記阻害抗体および遺伝子断片を用いて栓球cDNAライブラリーから栓球由来増殖因子の遺伝子クローニング進め、遅れている鳥類の増殖因子の研究に情報を提供したいと考えている。

在这项研究中，我们试图克隆鸡血栓细胞衍生的细胞生长因子（1）选择抑制细胞增殖活性的单克隆抗体的选择，以及（2）使用抗体筛选方法克隆生长因子基因。使用大约400个小鼠杂交瘤克隆的培养上清液，它们是使用鸡肉血小板细胞（TSP）（TSP）的无血清培养上清液（TSP）产生的，该培养物已被认为包含多种生长因子，以抑制TSP对Vero细胞和鸡肉胚胎成蛋白成蛋白成蛋白成蛋白成蛋白成蛋白成蛋白成蛋白成蛋白成蛋白成蛋白酶的增殖活性（CEF），但可以在选择中被选中。人们认为，TSP中有多种生长因子，也认为，即使抑制一种生长因子的活性，也很难检测到对整体生长活动的抑制作用。因此，TSP通过凝胶过滤部分纯化，并使用CEF和Vero细胞测量所获得的馏分的增殖活性。结果，在细胞类型的不同部分中检测到增殖活性的峰值。当前，使用该馏分测量了抗体的抑制作用，并且已经选择了几个具有抑制活性的克隆。将来，我们计划使用从这些克隆获得的单克隆抗体筛选抗体。此外，根据这些生长因子核苷酸序列，基于已知血小板衍生的生长因子HGF和PDGF的基因表达合成PCR引物，并使用血小板RNA进行RT-PCR。结果，使用HGF引物的RT-PCR产生了两个基因片段，它们在使用PDGF引物时与PDGFA链具有同源性的HGF和四个基因片段。将来，我们希望使用上述抑制性抗体和基因片段从血小板细胞cDNA文库中对血小板衍生的生长因子进行基因克隆，并提供有关鸟类中生长较慢的研究的信息。