均一化cDNAライブラリーを利用した花芽分化に関与する遺伝子の単離

使用均质 cDNA 文库分离参与花芽分化的基因

• 批准号: 08760085
• 负责人: 竹村 美保
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760085/
• 关键词: シロイヌナズナ; 均一化cDNAライブラリー; 花芽分化; ディファレンシャルスクリーニング; 花芽特異的発現; アンチセンスRNA; 形質転換体植物

これまでに、シロイヌナズナ均一化cDNAライブラリーのスクリーニングにより選抜された花芽特異的に低発現していると思われる385個のクローンについて、部分的に塩基配列を決定した。そして、塩基配列から予測されるアミノ酸配列について、データベースに対する相同性検索を行った。その結果、385個のうち32個はこれまでにシロイヌナズナで報告されている遺伝子と同じものであることがわかった。また、78個は植物あるいは動物などの既知遺伝子と有為な相同性を示し、ある程度機能予測できるものと思われた。残りの275個は既知遺伝子と相同性を示さない新規の遺伝子であることが明らかとなったが、このうち75個は、機能の予測はできないものの、塩基配列レベルでシロイヌナズナのEST(Expressed Sequence Tag)と相同性を示した。78個の既知遺伝子と相同性を示したクローンの中には、転写因子やシグナル伝達に関与するタンパク質リン酸化酵素と推測されるものや、細胞分裂や糖代謝に関与すると思われるものが存在した。これらは花芽分化に働いている可能性が期待され、まずノザン解析により発現の組織特異性を調べた。また、ノザン解析では発現が確認できないものがあったため、それらについてはRT-PCR法を用いて調べた。その結果、花芽特異的発現を示すものが数個見つかり、目的とする花芽分化初期特異的に低発現性のクローンを選抜することができたと考えている。現在、これらクローンの遺伝子構造を解析するために、全長cDNAの単離ならびに塩基配列の決定を行っている。これと並行して、それぞれのアンチセンスRNAを発現する形質転換体植物を作成し、表現型の変化を観察中である。さらには、機能の予測できない275個のクローンについても同様に形質転換体を作成しており、今後それらの表現型を観察することにより花芽分化に関与する遺伝子の単離とその機能解析を行っていく予定である。

到目前为止，我们已经部分确定了385个克隆的核苷酸序列，这些克隆是通过筛选均质拟南芥cDNA文库而选择的，并且被认为在花芽特异性中具有低表达。然后，针对从碱基序列预测的氨基酸序列对数据库进行同源性搜索。结果显示，385个基因中有32个与之前报道的拟南芥基因相同。此外，78个基因与植物或动物的已知基因表现出显着的同源性，人们认为它们的功能可以在一定程度上预测。其余275个基因被发现是与已知基因没有同源性的新基因，其中75个基因在核苷酸序列水平上被发现基于拟南芥EST（表达序列标签），尽管它们的功能无法预测。表现出同源性。在与78个已知基因表现出同源性的克隆中，有一些被认为是参与信号转导的转录因子和蛋白激酶，还有一些被认为与细胞分裂和糖代谢有关。预计这些可能在花芽分化中发挥作用，我们首先通过Northern分析研究了它们表达的组织特异性。此外，由于有一些基因的表达无法通过Northern分析确认，因此使用RT-PCR对其进行了研究。结果，我们发现了几个表现出花芽特异性表达的克隆，并且我们相信我们能够在花芽分化的早期阶段特异性地选择低表达的克隆。目前，为了分析这些克隆的遗传结构，我们正在分离全长cDNA并确定它们的核苷酸序列。与此同时，我们正在创建表达每种反义 RNA 的转化植物并观察表型变化。此外，我们同样为275个功能无法预测的克隆创建了转化体，通过观察它们的表型，我们将能够分离出参与花芽分化的基因并分析它们的功能。