温度感受性変異体を用いたc-fos遺伝子機能の解析

使用温度敏感突变体分析 c-fos 基因功能

基本信息

批准号：
63015018
负责人：
伊庭英夫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至 1988
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までの成果をふまえ,本年度はin vitro mutagenesisによるfosタンパクの機能領域の同定と,前年度に見い出したc-fos関連抗原の遺伝子のクローニングと構造決定をおこなったので報告する。1.fos遺伝子のin vitro mutagenesisv-fos遺伝子内に欠失変異をもつレトロウイルスベクターを使用して,CEFに対するトランスフォーメーション活性及びニワトリ神経網膜細胞に対する増殖刺激活性を検定した。その結果,野生株v-fosの約1/4の分子量からなる100アミノ酸残基未満からなる変異体(NDCD2)のfosタンパク質にも両活性が存在した。この領域は,野生株v-fosの中央部に位置し,進化的に極めて良く保存されていると共に,c-jun,GCN4遺伝子産物とある程度の相同性をもっていた。NDCD2のもつ変異体fosタンパク質は,野生株v-fosと異なり,細胞内でリン酸化を受けていないことから,v-fosタンパク質によるトランスフォーメーションには,fosタンパクのリン酸化が必須でないことが示された。2.fos関連遺伝子のクローニングと構造解析前年度に調製した抗fosペプチド抗体が,CEF中からc-fosタンパク質以外に数種の関連抗原を免疫沈降することを見い出した。この関連抗原が,細胞の増殖刺激を与えた後にc-fosタンパク質とは異なったkineticsで発現の誘導を受けることから,その機能の重要性が示唆された。そこで,この関連抗原の遺伝子のクローニングを試み,ニワトリゲノミックライブラリーから,複数のクローンを得た。そのうち1つのlocusから由来するものについては,塩基配列決定を含み構造解析中である。これまでの結果,c-fos遺伝子とはことなる未知の遺伝子であることが判明したが,c-fosタンパク質と同様leucine zippen構造を保有していることがわかった。

在去年取得成果的基础上，今年我们将报道fos蛋白功能区的体外诱变鉴定，以及c-fos相关抗原基因的克隆和结构测定。去年发现的。 1.fos基因的体外诱变使用fos基因缺失突变的逆转录病毒载体，测定对CEF的转化活性和对鸡神经视网膜细胞的生长刺激活性。结果，在突变体 fos 蛋白 (NDCD2) 中发现了这两种活性，该蛋白由少于 100 个氨基酸残基组成，分子量约为野生型 v-fos 的四分之一。该区域位于野生型v-fos的中心，进化上非常保守，与c-jun和GCN4基因产物具有一定的同源性。与野生型v-fos不同，NDCD2的突变fos蛋白在细胞内不被磷酸化，这表明fos蛋白的磷酸化对于v-fos蛋白的转化不是必需的。 2.fos相关基因的克隆和结构分析我们发现前一年制备的抗fos肽抗体除了来自CEF的c-fos蛋白外还免疫沉淀了几种相关抗原。该相关抗原功能的重要性通过以下事实表明：在刺激细胞增殖后，其表达以与c-fos蛋白不同的动力学诱导。因此，我们尝试克隆该相关抗原的基因，并从鸡基因组文库中获得了几个克隆。目前正在进行对源自一个基因座的结构分析，包括核苷酸测序。到目前为止，我们的结果表明该基因是一个未知基因，与c-fos基因不同，但它具有与c-fos蛋白相同的亮氨酸zippen结构。