デスモゾーム蛋白と天疱瘡の抗原物質の関連に関する研究

桥粒蛋白与天疱疮抗原关系的研究

• 批准号: 62570462
• 负责人: 西川 武二
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 1987
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62570462/
• 关键词: 天疱瘡; 抗表皮細胞間抗体; デスモゾーム; モノクローナル抗体; デスモプラキン

近年, 天疱瘡患者血中抗表皮細胞間抗体の抗原物質とデスモゾーム構成蛋白との関連が示唆されている. 本研究はデスモゾーム構成蛋白に対するマウスモノクローナル抗体を作成し, 天疱瘡抗体との関連を検討することを目的とした. デスモゾームはSkerrow & Matoltsyの方法に従い不連続蔗糖濃度匂配遠沈法を用いて, ウシ鼻表皮より分離精製した. この精製デスモゾームを免疫源としてBalb/cマウスを免疫し, 免疫マウス脾細胞とsp2/0細胞を用いて通常の方法によりhybridowaを作成した. ELISAを一次スクリーニング法として陽性wellを検索し, さらに, その陽性wellの中から蛍光抗体法により表皮細胞間に反応するwell1個を得た. 3回のlimitting dilutionによりクローニングし, さらに, プリスタン処理Balb/cマウス腹腔内に接種し, 腹水としてモノクローナル抗体を回収した. 蛍光抗体法により, この抗体は, 正常皮膚切片および培養細胞において, 表皮細胞間に強い反応性を示し, さらに, 細胞質にも若干の染色性を認めた. 精製デスモゾームを用いたWestern blot法により, この抗体は約240KDおよび約220KDの2本のバンドを染色した. 免疫電顕的に, この抗体は表皮細胞膜デスモゾームのattachment plaque部に反応した. 以上により, この抗体は, デスモプラキンIおよびIIに反応性を有する抗体と考えられた. 細胞質の反応性に関しては, 細胞質内にデスモプラキン蛋白の一部が存在する, 他の蛋白が同じエピトープを有する, 等の可能性が考えられるが, 今後, 検討が必要とされる. 各種天疱瘡患者血清とこの抗体によりブロッキング試験を施行したが, 天疱瘡抗体とこの抗デスモゾーム抗体の同一性は見出せなかった. 現在, 他のデスモゾーム構成蛋白に対するモノクローナル抗体の作成が進行中であり, これらの抗体を用いて, さらに, 各種天疱瘡抗体の抗原物質とデスモゾームとの関連を検討する予定である.

最近，已经提出，产生了血红蛋白血液和脱骨小体组成蛋白的抗表皮细胞间抗体的抗原性物质之间的关联。这项研究旨在创建针对脱发组成分蛋白的小鼠单克隆抗体，并检查与Pemphigus抗体的关联。使用不连续的蔗糖浓度气味离心方法根据Skerrow＆Matoltsy的方法将脱粒体分离并从牛鼻表皮中纯化。使用这种纯化的脱粘剂作为免疫源，对BALB/C小鼠进行了免疫，并使用使用免疫的小鼠脾细胞和SP2/0细胞的通常方法创建了杂种。 ELISA被用作阳性井的主要筛选方法，通过荧光抗体获得表皮细胞之间反应的孔。通过限制稀释，将单克隆抗体作为腹水收集到腹水中，通过接种pristane处理的BALB/C小鼠的腹腔腔，将单克隆抗体作为腹水收集。将抗体接种到BALB/C小鼠的腹膜腔中。通过免疫荧光抗体，该抗体在正常皮肤切片和培养的细胞中表现出强烈的反应性，并且在细胞质中也显示出轻微的染色。通过使用纯化的脱染色组，通过蛋白质印迹法，抗体染色了两个大约240 kD和约220 kd的条带。免疫电子显微镜上，该抗体与表皮细胞膜卵布的附着部分反应。该抗体被认为是一种对脱莫普拉金I和II反应的抗体。关于细胞质的反应性，在细胞质中存在一部分脱氨木蛋白的一部分，并且其他蛋白质具有相同的表位，但将来是必要的。尽管使用各种Pemphigus患者和该抗体的血清进行了阻塞测试，但未发现Pemphigus抗体的识别和这种抗疾病抗体。目前，目前正在进行与其他脱粘组成分蛋白的单克隆抗体，使用这些抗体，我们计划进一步研究各种Pemphigus抗体和脱粒体的抗原性物质之间的关联。