Analysis of Age-dependent Functional Changes in Skeletal Muscle CB1 Receptors by an in Vitro Model of Aging-related Muscle Atrophy

通过衰老相关性肌肉萎缩的体外模型分析骨骼肌 CB1 受体的年龄依赖性功能变化

基本信息

批准号：
22KJ2960
负责人：
森一明
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2960/
关键词：
PDMS CRISPR/Cas9 表面設計カンナビノイドCB1受容体

项目摘要

①生体適合材料ポリジメチルシロキサン（PDMS）を用いた伸展培養系をもとに骨格筋老化を評価可能なin vitroモデルの構築および、②CRISPR/Cas9システムを用いたカンナビノイドCB1受容体のノックアウト技術の確立を行った。また、in vivoでの骨格筋CB1受容体の機能を研究するためのノウハウを学ぶために、フランスボルドーに渡航し、「Team Endocannabinoids and Neuroadaptation (PI: Giovanni Marsicano)」にて研究滞在をした。①2021年度に確立したPDMSを用いた伸展培養系におけるPDMSの表面設計に関する論文を投稿し、レビューワーのコメントに従い追加実験を行った。追加実験では、伸展培養中におけるPDMS表面からのコラーゲン分子の溶出の評価と、Live Dead Assayを用いた伸展培養後の細胞接着の評価を行った。その結果、設計した表面では従来の方法に比べて、培養中でのコラーゲンの溶出が抑制され、また、伸展培養における細胞接着も向上する結果が得られた。それら結果を踏まえてリバイズした原稿を再投稿したがリジェクトとなってしまったため、現在他の論文誌への投稿を準備中である。上記の結果については、国際学会「32nd Annual Conference of the European Society for Biomaterials」にてポスター発表を行った。②ヒトカンナビノイド受容体をコードするCnr1遺伝子に変異を加えうるsgRNAを同定し、そのsgRNAを用いて神経芽細胞腫SH-SY5YのCnr1遺伝子に変異を加えることに成功した。現在は、その細胞のCB1受容体の欠失および機能障害を評価している。

1) 使用生物相容性材料聚二甲基硅氧烷 (PDMS) 构建能够评估骨骼肌老化的体外模型，以及 2) 使用 CRISPR/Cas9 系统建立大麻素 CB1 受体敲除技术。它。此外，为了学习研究体内骨骼肌CB1受体功能的专业知识，我前往法国波尔多，在“Team Endocannabinoids and Neuroadaptation”（PI：Giovanni Marsicano）进行研究。 ①我们提交了一篇关于2021年建立的使用PDMS的延伸培养系统中PDMS表面设计的论文，并根据审稿人的意见进行了补充实验。在其他实验中，我们评估了拉伸培养过程中胶原蛋白分子从 PDMS 表面的洗脱情况，并使用活死实验评估了拉伸培养后的细胞粘附情况。因此，与传统方法相比，设计的表面抑制了培养过程中的胶原蛋白洗脱，并改善了拉伸培养过程中的细胞粘附。我根据这些结果修改了稿子，重新投了，但是被拒绝了，所以目前准备投给另一个期刊。我们在国际会议“欧洲生物材料学会第32届年会”上对上述结果进行了海报展示。 ②我们鉴定了一种可以突变编码人大麻素受体的Cnr1基因的sgRNA，并成功利用该sgRNA突变了神经母细胞瘤SH-SY5Y的Cnr1基因。我们目前正在评估这些细胞中 CB1 受体的缺失和功能障碍。