網羅的遺伝子解析手法を用いたゲフィチニブ耐性化機序の解明

利用综合遗传分析方法阐明吉非替尼耐药机制

• 批准号: 26860616
• 负责人: 寺井 秀樹
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26860616/
• 关键词: EGFR-TKI; DNAメチル化; epigenetics

資金責任者らが半年間の長期ゲフィチニブ曝露によってEGFR遺伝子陽性肺癌細胞株PC9より作成したゲフィチニブ耐性細胞株PC9 GRを用いてメチル化及びmRNAの網羅的解析を行った。その結果、感受性株と比較して耐性株においてDNAメチル化が亢進し、mRNAの発現が低下しており、メチル化の変化がゲフィチニブの耐性化との関与が考えられる遺伝子を候補遺伝子（s100p、klotho、c10orf116、RASSF1A、IGFBP3、）として同定した。さらにその候補遺伝子の中から、IGFBP3、klotoho、s100pを中心に解析を行った。結果としてわずかではあるが、klothoやs100pが耐性化に関与していることが考えられ、siRNAを用いたknock downによって感受性株がわずかに耐性化することが示唆された。ひとつひとつのメチル化に伴う耐性化への影響は少ないものの、多数集まることで細胞株の耐性化に寄与している可能性が考えられた。同結果について今後論文投稿予定としている。資金責任者の海外留学に伴い本科研費に基づく研究に関しては一旦終了となった。klothoに関しては、同細胞株の主要耐性化機序として報告済みのFGF2-FGFR1活性化との関与も考えられ、関連性について評価を予定している。また、既に解析を終えているHCC827肺癌細胞株での同様な解析と照らし合わせてより普遍性の高い実験を行っていく予定としている。

基金受力的人使用gefichinib耐药细胞PC9 GRR进行了甲基化和mRNA -Complemensible分析，这是由EGFR阳性肺肺癌细胞PC9创建的，这是由于半年暴露于半年暴露的半年。结果，与敏感库存相比，抗性库存中的DNA甲基化增加了，mRNA的表达下降了，甲基化的变化被认为与Gefichinib的耐受性有关（S100P，S100P，S100P，（S100P，S100P，S100P，）。被识别为Klotho，C10ORF116，RASSF1A，IGFBP3）。此外，我们分析了候选基因的IGFBP3，klotoho和S100p。结果，认为Klotho和S100P参与了抗性，这表明使用siRNA击倒可以稍微抵抗敏感的库存。尽管每种甲基化引起的每种甲基化的影响都很小，但大量聚集可能有助于耐受细胞库存。结果计划将来发布在结果上。对国外留学资金的人的研究曾经完成。关于Klotho，还考虑了报道的FGF2-FGFR1激活作为细胞库存的主要公差机制的参与，并计划评估相关性。此外，鉴于已经完成分析的HCC827肺癌细胞库存中的类似分析，该公司计划进行更多的通用实验。

项目成果

Aberrant DNA methylation and expression of mRNA in EGFR-mutant lung cancer cell line with long-term exposure to gefitinib

长期暴露于吉非替尼的 EGFR 突变肺癌细胞系中异常 DNA 甲基化和 mRNA 表达

• 发表时间: 2014
• 作者: A Hida;Y Ohsawa;S Kitamura;K Nakazaki;N Ayabe;Y Motomura;K Matsui;M Kobayashi;A Usui;Y Inoue;H Kusanagi;Y Kamei;K Mishima;梶原 千晶;Hideki Terai
• 通讯作者: Hideki Terai