精母細胞に於いて miR-34c と共局在する因子の探索とその意義の解析

寻找精母细胞中与miR-34c共定位的因子并分析其意义

基本信息

批准号：
16K18979
负责人：
遠藤大輔
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は超解像顕微鏡を用い、mir-34c の精母細胞に於ける局在を詳細に解析することにより、このmicroRNA と相互作用するタンパク質及びmRNAを同定することによりその減数分裂に於ける役割を明らかにすることである。平成28年度には超解像顕微鏡を用い、複数に因子の相互作用を観察する手法を確立する目的で、PCNA及びそれと相互作用するドメインを持つメチル基転移酵素1の共局在解析を行った。構造化照明法による解析により、これら2因子が100 nm 未満という非常に近い距離で精母細胞核内に共局在していることが観察された。また、免疫沈降法により精巣に於いてこれらが相互作用していることも明らかとなった。平成29年度にはmir-34cを他のRNAとの二重染色により解析する手法の開発を行った。mir-34c 及び 28S rRNA の二重染色を行うと、mir-34c 精母細胞の細胞質に雲上に広がるばかりではなく、核内の一部に局在していた。その局在部位は28S rRNA の核内での局在領域と重なっていることから、核小体であると考えられ、精母細胞においてmir-34cは核小体にストックされていることが明らかとなった。また、光活性局在法により、50 nm未満の距離でこれらの因子が共局在していることも観察された。以上の結果から、mir-34c がどのような因子と共局在しているかを詳細に解析する準備は整ったといえる。平成30年度は研究を中断していたため、実績は上がっていない。

这项研究的目的是利用超分辨率显微镜详细分析mir-34c在精母细胞中的定位，并鉴定与这种microRNA相互作用的蛋白质和mRNA，目的是阐明政府所扮演的角色。 2016财年，我们利用超分辨率显微镜对PCNA和具有与PCNA相互作用的结构域的甲基转移酶1进行共定位分析，旨在建立一种观察多因素相互作用的方法。使用结构化照明分析，我们观察到这两个因子以小于 100 nm 的非常近的距离共定位在精母细胞核内。此外，免疫沉淀显示它们在睾丸中相互作用。 2017财年，我们开发了一种通过与其他RNA双染色来分析mir-34c的方法。 mir-34c和28S rRNA双重染色显示，mir-34c不仅分布在精母细胞的细胞质中，而且还定位于部分细胞核。由于其定位位点与28S rRNA的核定位区域重叠，因此认为其位于核仁中，并且明确mir-34c储存在精母细胞的核仁中。我们还使用光激活定位观察到这些因素在小于 50 nm 的距离处的共定位。从以上结果可以说，我们现在准备对 mir-34c 共定位的因素进行详细分析。研究在 2018 财年暂停，因此结果并未改善。