マウスを用いTRPA1イオンチャネルに着目した脈絡膜血管新生の新規治療戦略の確立

利用小鼠建立以 TRPA1 离子通道为重点的脉络膜新生血管治疗新策略

• 批准号: 15K20278
• 负责人: 臼井 恵子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K20278/
• 关键词: TRPA1; algon laser induced CNV; 脈絡膜新生血管; 角膜新生血管

TRPA1は感覚神経細胞に主に発現するCa2+イオンチャネルである。本研究では、TRPA1欠失マウスでのレーザー誘発実験的脈絡膜血管新生(CNV)の形成を軽減させることが出来るか否かを検討した。TRPA1欠失はレーザー誘発CNVを優位に抑制し、その際、TRPA1陽性細胞は血管内皮細胞と共発現はしないが近接に発現していた。炎症細胞浸潤を評価するため、TRPA1遺伝子欠失がF4/80陽性細胞におけるVEGF、TGFβ1mRNA発現レベルに影響するかを調べたが、これらはTRPA1に影響されなかった。レーザー照射後の脈絡膜組織からRNAを抽出し、TGFβ-1、MPO、VEGF、F4/80などについてRT-PCRを行ったが、TRPA1欠失はTGFβ-1、MPOの抑制は認めたがその他は差を認めなかった。脈絡膜への炎症細胞浸潤は、VEGFおよびTGFβ-1を含む血管新生増殖因子供給源の１つであると考えられる。今後は血管内皮細胞やマクロファージ特異的なコンディショナル欠失マウスを作成し、レーザー誘発CNV実験を予定してる。血管新生反応は、ERK1/2MAPKおよびAktシグナルを介している。培養ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を用いた検討では、いずれの経路もTRPA1作動薬、拮抗薬に影響されなかった。このため我々は血管内皮細胞に隣接するTRPA1陽性細胞の活性化が血管内皮のVEGFRを活性化しCNV形成を誘導すると仮定し、TRPA1を発現し、かつ血管内皮と近接することから繊維芽細胞に着目し、HUVECと繊維芽細胞の共培養系を用いて検討を行った。結果、TRPA1遮断がHUVECによる新生血管作用を抑制した。TRPA1拮抗薬によるHUVEC管腔形成の阻害は、線維芽細胞層に存在するTRPA1機能の遮断によるものと考えられた。以上から、TRPA1シグナル制御によりCNVを抑制できる可能性がある。

TRPA1是一种Ca2+离子通道，主要在感觉神经元中表达。在这项研究中，我们研究了它是否可以减少TRPA1缺陷小鼠中激光诱导的实验性脉络膜新生血管形成（CNV）的形成。 TRPA1缺失主要抑制激光诱导的CNV，其中TRPA1阳性细胞近端表达，尽管未与血管内皮细胞共表达。为了评估炎症细胞浸润，我们研究了TRPA1基因缺失是否影响F4/80阳性细胞中的VEGF，TGFβ1mRNA表达水平，但是这些不受TRPA1的影响。激光照射后从脉络膜组织中提取RNA，并在TGFβ-1，MPO，VEGF，F4/80等上进行RT-PCR，但TRPA1缺失显示TGFβ-1和MPO的抑制作用，但在其他情况下未观察到差异。据信，炎症细胞浸润为脉络膜，是血管生长因子的来源之一，包括VEGF和TGFβ-1。将来，我们计划创建针对血管内皮细胞和巨噬细胞的条件缺失小鼠，并进行激光诱导的CNV实验。血管生成反应通过ERK1/2MAPK和AKT信号。在使用培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的研究中，均未受到TRPA1激动剂或拮抗剂的影响。因此，我们假设与血管内皮细胞相邻的TRPA1阳性细胞的激活激活了血管内皮细胞中的VEGFR并诱导CNV形成，并着重于成纤维细胞，因为它们表达了TRPA1，并且使用血管内皮层和研究的系统非常接近trpa1，并在近端近端进行了coculture and coculture and huvib and huvib and huvib and frobers and f。结果，TRPA1阻断抑制了由HUVEC引起的新生血管作用。 TRPA1拮抗剂对HUVEC管腔形成的抑制被认为是由于成纤维细胞层中存在的TRPA1功能的阻滞。从以上，可以通过TRPA1信号控制来抑制CNV。

项目成果

培養ヒト臍帯静脈血管内皮細胞における血管新生と線維化へのTRPA1の関与

TRPA1参与培养人脐静脉内皮细胞的血管生成和纤维化

• 发表时间: 2017
• 作者: Usui-Kusumoto K;Iwanishi H;Ichikawa K;Okada Y;Sumioka T;Miyajima M;Liu CY;Reinach PS;Saika S.;楠本 恵子
• 通讯作者: 楠本 恵子

マウス角膜血管新生におけるTRPA1イオンチャネル受容体の役割

TRPA1离子通道受体在小鼠角膜血管生成中的作用

• 发表时间: 2015
• 作者: 原賀順子;春間朋子;西田傑;中村圭一郎;平松祐司;Keiko Kusumoto;春間朋子ら;楠本恵子
• 通讯作者: 楠本恵子

Roles of TRPA1 cation channel receptor signal in development of stromal neovascularization in a mouse cornea

TRPA1阳离子通道受体信号在小鼠角膜基质新生血管形成中的作用

• 发表时间: 2015
• 作者: 原賀順子;春間朋子;西田傑;中村圭一郎;平松祐司;Keiko Kusumoto
• 通讯作者: Keiko Kusumoto