染色体複製開始因子の制御機構から捉えた細胞増殖とがん化の研究

从染色体复制起始因子控制机制研究细胞增殖与癌症发生

• 批准号: 15024251
• 负责人: 西谷 秀男
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15024251/
• 关键词: 複製; ライセンス化; がん; Cdt1; ユビキチンープロテアソーム系; 染色体

染色体複製を開始し、複製を細胞周期に一度のみに限定する制御機構は、細胞増殖と遺伝情報の維持のために必須の制御機構である。我々はこれらの機構をあきらかにするため、複製のライセンス化因子Cdt1を中心に研究を行ってきた。(1)Cdt1の分解制御Cdt1のS期における分解は、ユビキチン-プロテアソーム系により行われることを示してきた。Cdt1のN末およびC末を安定に発現する細胞を作製し、N末が分解に関与しており、さらに藤田博士(国立ガンセンター)との共同研究により、N末に存在するCyclinA結合部位を通して、Cdt1がリン酸化されてユビキチン化に関わるSkp2が結合することを明らかにした。また、DNA傷害を起こすUVを細胞に照射すると、Cdt1が素早く分解されることを見いだした。同じくライセンス化因子であるCdc6もかなり分解されたが、Orc1,MCM3は安定だった。この分解にも、Cdt1のN末が関与しており、ユビキチン-プロテアソーム系により分解されることを明らかにした。(2)過剰複製の誘導分解に関わるN末を除いたCdt1は、S期で安定に存在し、293T細胞に高発現させると、4C以上のDNA量を持つ細胞が高頻度で出現し、再複製が誘導されたと予想された。(3)Cdt1結合因子の検索Flag-Cdt1を発現する細胞を作製し、Flag抗体免疫沈降によりCdt1と共沈するものの検索を行い、30kdaのGemininの他、35,45,47kDaのタンパク質を見つけた。(4)がん組織でのCdt1の発現複製開始に必須なCdt1は、がん組織での発現が上昇していると考えられる。三菱生命研・宋博士との共同研究により、がん化の進行と共に、Cdt1の発現量が上昇していることを明らかにした。

启动染色体繁殖并将重复限制为细胞周期的控制机制是细胞生长和维持遗传信息的基本控制机制。我们一直在进行有关重复许可CDT1的研究，以阐明这些机制。 （1）在S期间，CDT1分解控制CDT1的分解已表明它是由泛素 - 蛋白酶体系统进行的。稳定地表达CDT1和C结束的细胞，N的末端参与了分解，并通过与Cyclina（国家枪支中心）的联合研究，通过Cyclina加入了最终存在的网站n。揭示了CDT1是磷酸化的，并且合并了参与泛素化的SKP2。他还发现，当导致DNA损伤的紫外线被细胞照射时，CDT1很快被分解。 CDC6是一个许可因素，也被大量分解，但ORC1和MCM3稳定。这种分解也参与了CDT1的末尾，并被泛素 - 蛋白酶系统拆卸。 （2）CDT1（不包括n端）在S时期内涉及过度推导，并且在293T细胞中表达时，具有4C或更多DNA的细胞会出现经常出现并重复出现。被诱导。 （3）搜索CDT1连接因子产生了表达Flag-CDT1的细胞，搜索由于Flag抗体免疫沉积而导致的CDT1的事物，并发现了35,45,47KDA蛋白除30kDa Geminin外。 （4）CDT1对于癌组织中CDT1表达的开始至关重要，被认为在癌组织的表达中升高。与三菱Ryogen和Song博士的联合研究表明，随着癌症的发展，CDT1表达已经上升。