第16番染色体連鎖型優性遺伝性脊髄小脳変性症の原因遺伝子同定と分子病態の解明

16号染色体连锁显性脊髓小脑变性致病基因的鉴定和分子病理学的阐明

基本信息

批准号：
15016042
负责人：
石川欽也
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度我々は第16番染色体連鎖型脊髄小脳変性症(16q-ADCCA)の原因遺伝子を同定するために、候補領域内に存在する30個に上る遺伝子について変異のスクリーニングを行った。方法は、各遺伝子の全てのexonについてintron-exon境界領域を含めて、DNAをPCRで増幅した。対象は健常日本人と16q-ADCCA患者とした。本年度、全ての候補遺伝子について解析をほぼ完了した。その結果、患者に特有の遺伝子のvariationを2箇所同定した。すなわち、健常日本人の100名には検索した範囲で存在せず、16q-ADCCAの40家系の患者には全員共通している変化であった。このうち1つはある遺伝子内のexonにあり、真の遺伝子変異である可能性が期待された。このため、この遺伝子の正確な構造を決定するために、RT-PCR法などを用いて、遺伝子の発現パターン、脳に限らず組織ごとの発現の有無などを解析すると共に、alternative splicingによるisoformの検索を行った。もうひとつの特異的変化を有する遺伝子についても現在同様の解析を行っている。一方、この特異的な変化を検索することで逆にこれまでは連鎖解析に頼らざるを得なかった遺伝子診断をより簡便かつ正確に16q-ADCCAの診断を遺伝子レベルで行うことができるようになった。この今のところ特異的な遺伝子変化を有する家系の中から、剖検例が得られた。これは本病型の神経病理学的検索を行えた世界で最初の例である。本症例の神経病理所見は、臨床症状から予想された様に、小脳皮質の変性に限定された。すなわち小脳皮質Purkinje細胞優位の神経細胞脱落が見られ、顆粒細胞脱落などは比較的軽度であった。また、Purkinje細胞はしばしば萎縮し、その細胞体周囲にはhematoxylin-eosin染色でeosin好性に染まる冠状のamorphousな構造物が細胞体を取り囲むように存在していた。このような変化は類縁の脊髄小脳変性症を含めて報告がなく、本疾患に特徴的な変化であると考えられた。以上の分子遺伝学的、神経病理学的知見を誌上報告する準備中である。

今年，我们筛选了候选区域中存在的30个基因的突变，用于染色体链接脊髓杆菌变性（16Q-ADCCA）。该方法是PCR扩增的DNA，包括每个基因所有外显子的介绍 - 外观边界区域。受试者包括健康的日本人和16Q-ADCCA患者。今年，对所有候选基因的分析几乎完成了。结果，确定了患者独有的两种基因变体。换句话说，没有100名健康的日本人搜查，这是40个16Q-ADCCA家庭中所有患者常见的变化。其中之一是在基因内的外显子中发现的，预计将是一个真正的遗传突变。因此，为了确定该基因的确切结构，我们分析了基因的表达模式，不仅是大脑，以及它是否在每个组织中表达，使用替代剪接并搜索同工型。目前正在针对具有另一个特定变化的基因进行相同的分析。另一方面，搜索这种特定的变化使得进行更方便，更准确的遗传诊断是可以在基因水平上进行16Q-ADCCA诊断的更方便，更准确的遗传诊断。已经从目前拥有特定遗传改变的家族那里获得了尸检病例。这是世界上第一个对这种疾病进行神经病理学搜索的方法。如临床症状所预期的那样，这种情况的神经病理学发现仅限于小脑皮层的变性。换句话说，观察到神经元丧失，小脑皮层中主要的浦肯野细胞，颗粒细胞损失相对轻度。普kinje细胞也经常萎缩，并且在细胞体周围发现周围的冠状动脉毒害结构，并用苏木精 - 欧洲蛋白染色染色。尚未报道此类变化，包括相关的脊椎样变性，被认为是疾病的特征变化。我们目前正在准备在杂志中报告上述分子遗传学和神经病理学发现。