中心体成熟と複製を制御する遺伝子群の単離と機能解析

控制中心体成熟和复制的基因的分离和功能分析

基本信息

批准号：
20058039
负责人：
寺田泰比古
金额：
$ 4.61万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

1)中心体の成熟因子として発見したショウジョウバエのCNN遺伝子の動物細胞のホモログとしてCDK5RAP2遺伝子を単離し、CNNと高度に保存されているN末領域のドメイン(CNN box)単独でMTOCの活性を示すことを明らかにした。さらにCNN boxに結合する蛋白質をライブラリーからスクリーニングしたところ、カエルや線虫からヒトに至るまで高度に保存され、これまで解析されていない遺伝子CEP140を単離し、この蛋白質が中心体に局在することを確認した。機能解析によって、中心体成熟と中心体小体同士を結びつける役割を果たしていることを明らかにした。2)Aurora-Aによる紡錘体形成の制御システムを明らかにする目的で、Aurora-A結合蛋白質としてG2/M期移行に関与すると報告されているSET/NAP出芽酵母の遺伝子を単離した。SET/NAP蛋白質はPP2Aのinhibitorであることが報告されていることから、PP2Aとの相互関係を調べたところ、これらはAurora-Aとともに複合体を形成し、M期中心体に存在すること、PP2AのRNAiによる表現型は紡錘体形成を阻害する一方、SETの高発現も同様の表現型を示すことを動物細胞の培養細胞株とカエル卵再構成系で明らかにした。Aurora-A結合蛋白質としてSET/NAP遺伝子を単離し、ヒト培養細胞とカエル卵再構成系で、PP2Aインヒビターとして、Aurora-Aの下流で紡錘体形成の調節に関与していることを明らかにした。

1）我们将CDK5RAP2基因分离为果蝇中CNN基因的动物细胞的同源物，该基因被发现为中心体成熟因子，并揭示了CNN和单独的N末端区域（CNN Box）的高度保守结构域显示MTOC活性。此外，当从文库中筛选了与CNN盒结合的蛋白质时，从尚未分析的高度保守基因CEP140被从青蛙和线虫分离为人类，并确认该蛋白质定位于中心体。功能分析表明，它在将中心体成熟与中心体体联系起来中起作用。 2）为了阐明Aurora-A纺锤体形成的调节系统，我们分离了集合/NAP萌芽的酵母基因，据报道，该基因与G2/M相变为Aurora-A结合蛋白。由于据报道，集合/NAP蛋白是PP2A的抑制剂，我们研究了与PP2A的关系，并揭示了这些与Aurora-A形成复杂的，并且存在于M相中心体中，RNAI-rNAI诱导的PP2A的表型在PP2A的表型中抑制了Spindle表面，同时在动物群中表达了类似的群组群体的群体群体，并培养了一个类似的群组。将set/nap基因分离为Aurora-A结合蛋白，并揭示它参与了人培养细胞中Aurora-A下游的主轴形成的调节，并作为PP2A抑制剂的青蛙卵重建系统。