低分子量G蛋白質の活性調節におけるイソプレニル化酵素の役割

异戊二烯化酶在调节低分子量 G 蛋白活性中的作用

• 批准号: 20054018
• 负责人: 松岡 功
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Takasaki University of Health and Welfare
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20054018/
• 关键词: シグナル伝達; 3量体G蛋白質; 低分子量G蛋白質; HMG-COA還元酵素阻害剤; チロシンリン酸化; ゲラニルゲラニルピロリン酸; ファルネシル転移酵素; ゲラニルゲラニル転移酵素

我々はこれまでに蛍光標識したGGTaseおよびFTaseの基質ペプチドを用いて細胞のFPPやGGPPがHMG-CoA還元酵素阻害薬処理後ダイナミックに変化することを示した。また、この方法を応用して内因性のGGTaseおよびFTaseの活性を測定し、Gタンパク質共役型受容体刺激がGGTaseやFTase(の活性化を増大させることを見出した。今回はその作用機構について検討した。血管内皮細胞において、リゾホスファチジン酸(LPA)やトロンビン、スフィンゴシン1リン酸(S1P)は、内因性のFTase活性を増大させた。この反応は細胞を百日咳毒素で処理すると抑制されることから、Giを介した反応であると考えられた。このFTaseの活性化はPI3キナーゼ阻害薬や、ERK阻害薬、p38MAPキナーゼ阻害薬では影響されなかったが、チロシンキナーゼ阻害薬のPP2により抑制された。また、βγサブユニットの機能を阻害するβARKのc末端をアデノウイルスにより発現させると抑制された。FTaseは、FTaseαとFTaseβのヘテロダイマーで機能的な酵素を構成する。HEK293細胞にFTaseαとFTaseβのcDNAを発現させると、FTase活性の増大が認められた。このリコンビナント酵素の活性調節も、内皮細胞で認められた制御機構と同様の性質を示した。このことから、イソプレニル転移酵素のうち少なくともFTaseの活性はG蛋白質のβγサブユニットの下流でチロシンリン酸化を介して制御されることが示唆された。

我们已经表明，使用荧光标记的GGTase和FTase底物肽用HMG-COA还原酶抑制剂处理后，细胞FPP和GGPP会动态改变。此外，该方法应用于测量内源性GGTase和FTase的活性，发现G蛋白偶联受体刺激会增加GGTase和FTase的激活（。这次，我们研究了作用机理。溶血磷酸酸（LPA），倾斜度1-磷酸化酶（S1p）的活性增加了。当用百日咳毒素处理细胞时，该反应被认为是gi介导的FTase的激活。抑制βγ亚基的功能的β公园也被腺病毒​​抑制了FTaseα和FTaseβ的异二聚体的功能性酶。在内皮细胞中观察到的机制。这表明，至少在异on-转移酶中FTase的活性通过G蛋白的βγ亚基下游的酪氨酸磷酸化来调节。