無細胞翻訳系を応用した植物膜輸送体の機能解析

使用无细胞翻译系统对植物膜转运蛋白进行功能分析

• 批准号: 20053016
• 负责人: 戸澤 譲
• 金额: $ 2.82万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20053016/
• 关键词: 無細胞翻訳; タンパク質; 生体分子; 脂質; 植物

膜輸送タンパク質は、膜貫通領域が疎水性に富むアミノ酸残基で構成されているという性質を有するため、水溶性のタンパク質と異なり、機能を保持した形での組み換えタンパク質調製が著しく困難である。本課題では、従来の組み換えタンパク質調製法の欠点を補う新規技術として我々が開発したコムギ無細胞翻訳系を利用する試験管内での膜輸送タンパク質の可溶化合成系を、様々な植物膜輸送タンパク質の機能構造解析に応用することを目的として研究を進めている。今年度は、まず無細胞翻訳系でアミノ末端を均一化する新たな技術の構築を進め、学会報告とともに論文発表を行った。7回膜貫通領域を有するモデル膜タンパク質バクテリオロドプシンのプロテオミセル合成の技術開発に成功した。さらに、膜輸送タンパク質のリン酸化などに関与するミリストイル化タンパク質の機能解析システム確立も完了した。これらの研究成果は、和文総説および学会において報告し、原著論文として投稿中である。

膜转运蛋白具有其跨膜区域由高度疏水性氨基酸残基组成的特性，因此与水溶性蛋白不同，以保留其功能的形式制备重组蛋白是极其困难的。在这个项目中，我们将利用小麦无细胞翻译系统开发膜转运蛋白的体外溶解合成系统，该系统是我们为弥补传统重组蛋白制备方法的缺点而开发的新技术。目的是将其应用于功能结构分析。今年，我们首先构建了一种利用无细胞翻译系统均质化氨基末端的新技术，并提交了一篇论文和会议报告。我们成功开发了细菌视紫红质的蛋白质胶束合成技术，细菌视紫红质是一种具有七个跨膜区域的模型膜蛋白。此外，我们还完成了肉豆蔻酰化蛋白功能分析系统的建立，这些蛋白参与膜转运蛋白的磷酸化。这些研究成果已在日本评论和学术会议上报道，目前正在作为原始论文提交。

项目成果

コムギ無細胞翻訳系を用いたタンパク質ミリストイル化修飾の配列特異性の解析

利用小麦无细胞翻译系统分析蛋白质肉豆蔻酰化修饰的序列特异性

• 发表时间: 2010
• 作者: 山内清司;林秀則;戸澤譲
• 通讯作者: 戸澤譲

無細胞翻訳系における翻訳促進配列の開始Met-tRNAのコドン認識に与える影響

无细胞翻译系统中促翻译序列对起始Met-tRNA密码子识别的影响

• 发表时间: 2010
• 作者: 太田史;松岡宏樹;野村勇太;源治尚久;戸澤譲
• 通讯作者: 戸澤譲

コムギ無細胞翻訳系を利用した植物タンパク質のミリストイル化機構解明

利用小麦无细胞翻译系统阐明植物蛋白的肉豆蔻酰化机制

• 发表时间: 2009
• 作者: 戸澤譲;山内清司;魚住信之;林秀則;遠藤弥重太
• 通讯作者: 遠藤弥重太

無細胞翻訳系を利用した膜タンパク質の機能解析

使用无细胞翻译系统对膜蛋白进行功能分析

• 发表时间: 2009
• 期刊: 化学と生物 47
• 作者: 戸澤譲;野澤彰;源治尚久
• 通讯作者: 源治尚久

Production of membrane proteins through the what-germ cell-free technology.

通过无胚细胞技术生产膜蛋白。

• 发表时间: 2010
• 期刊: Methods in Molecular Biology 607
• 作者: 野澤彰;七宮英晃;戸澤譲
• 通讯作者: 戸澤譲