匂い環境適応における細胞接着分子OCAMの役割

细胞粘附分子OCAM在气味环境适应中的作用

基本信息

批准号：
19045022
负责人：
椛秀人
金额：
$ 4.03万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、匂い・フェロモン環境に応じてどのようにセルセンサー機能を変化(モーダルシフト)させ、引いては個体適応へと導くのかという問題の解明を目指している。本年度は特に、匂い環境適応におけるOCAMの役割、アデノウイルスベクターを用いた鋤鼻受容体のin vitro発現・フェロモン応答評価系の確立に関する解析を行い、以下の成果を得た。昨年度、OCAM遺伝子欠損マウスの脳切片を用いて種々の電気生理学的解析を行い、OCAM欠損マウスでは、嗅神経の興奮・伝播から神経伝達物質放出までのいずれかの段階で障害があることを明らかにした。そこで、嗅細胞自体の異常を詳細に解析するために、今年度はin vitroにおける嗅細胞の単独培養系、嗅細胞とその投射先である嗅球細胞との共培養系の確立を試み、詳細な解析に適した嗅細胞-嗅球細胞共培養系を得ることができた。この系を用いて電気生理、イメージングによる解析を行っている。鋤鼻受容体とフェロモンの対応関係を明らかにするために、ラット鋤鼻培養細胞に対し特定の鋤鼻受容体VIRb2遺伝子を組み込んだアデノウイルスベクターを感染させ、Cre-loxP系を介してVIRb2を強制発現させた。強制発現の後、カルシウムイメージングで発現・応答の評価を行ったところ、投射先の副嗅球と共培養を行った場合にのみ、VIRb2のリガンドとして知られている2-heptanoneに対する選択的な応答が得られた。このin vitro発現・フェロモン応答評価系は、鋤鼻受容体とフェロモンとの対応関係を明らかにするためのツールとして有効である。

我们的目的是阐明如何根据气味和信息素环境将细胞传感器功能模态转移的问题，然后导致单个适应。今年，我们对OCAM在适应气味环境中的作用以及使用腺病毒载体为vonasal受体建立了OCAM在适应气味环境中的作用进行了分析，并获得了以下结果。去年，使用OCAM缺陷型小鼠的脑部进行了各种电生理分析，表明OCAM缺陷型小鼠在任何阶段因嗅觉神经激发和传播神经递质释放而患有疾病受损。因此，为了详细分析嗅觉细胞本身的异常，今年，我们试图建立嗅觉细胞的单个培养系统和嗅觉细胞的共文化系统和嗅球细胞，而嗅球细胞是其投影的靶标，并能够获得适合详细分析的共文化系统。该系统用于通过电生理学和成像分析。为了澄清vonasal受体和信息素之间的对应关系，用腺病毒载体感染了大鼠vonasal培养的细胞，该腺病毒载体融合了特定的vonasal受体VirB2基因，并且被迫通过CRE-LoxP系统表达VirB2。在强制表达后，通过钙成像评估表达和反应，并且仅在与靶向的辅助辅助嗅球共培养时，才能获得对2-霍酮（称为VIRB2配体的配体）的选择性响应。这种体外表达和信息素反应评估系统是阐明vonasal受体和信息素之间对应关系的工具的有效工具。