低分子量G蛋白質Rap2とがん細胞の分化異常

低分子量G蛋白Rap2与癌细胞异常分化

基本信息

批准号：
18013044
负责人：
苅谷研一
金额：
$ 7.42万
依托单位：
University of the Ryukyus
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18013044/
关键词：
癌シグナル伝達ノックアウトマウス Rap2 MAP4K がん細胞上皮細胞極性異常

项目摘要

私共はRasファミリー蛋白質Rap2のエフェクターとしてHGK、TNIK、MINKを同定したが、これらはMAPKKKキナーゼ(MAP4K)としてJNKやp38を制御することから、Rap2はMAPキナーゼ経路を介して細胞分化に関与する可能性が高い。一方、TNIKがJNKと独立に細胞基質接着を制御することも見出しており、Rap2は未知のシグナル経路を介してがん細胞の異常形質に関与すると考えている。Rap2とがん細胞の分化異常の関連を明らかにするため、(1)未知のシグナル経路の解析、(2)がん細胞における解析、(3)遺伝学的解析を進めた。その結果、(1)で見出した新規MAP4K結合蛋白質の一つは、ショウジョウバエRolsの哺乳類ホモログで、TNIKのリン酸化標的蛋白質でもあった。この分子は細胞極性、細胞間接着に関与する癌抑制遺伝子産物DLG1のPDZドメインに結合する。DLG1は上皮細胞の細胞間接着部位に集積するが、(2)の解析ではこの分子も扁平上皮癌細胞株の細胞間接着部位にRap2、TNIK、DLG1と共局在した。この癌細胞ではTNIKの過剰発現により細胞間接着と細胞極性の喪失が認められた。(3)Rap2A,B,CおよびTNIKのコンディショナルノックアウトマウス作成を進めた。Rap2Bは、germ-line transmissionマウスと野生型マウスの仔としてヘテロマウスを得た。現在、コンディショナルノックアウトの前に全身でCre組換え酵素を発現するマウスとの交配によるnullマウスの作成を行っている。Rap2A,CおよびTNIKについても作業を進めている。また、Rap2A,B,Cは相同性が高く識別できる抗体が無かったため、比較的相同性の低いC末端領域を抗原として抗血清を得、アフィニティー精製により特異抗体を作成した。

我们已经将HGK，TNIK和MINK鉴定为RAS家族蛋白RAP2的效应子，该蛋白RAP2将JNK和P38调节为MAPKKK激酶（MAP4K），因此RAP2可能通过MAP激酶途径参与细胞分化。另一方面，我们还发现TNIK独立于JNK调节细胞底物粘附，并且我们认为Rap2通过未知的信号传导途径参与了癌细胞的异常特征。为了阐明RAP2与癌细胞分化异常之间的关系，我们进行了（1）分析未知信号途径，（2）癌细胞分析以及（3）遗传分析。结果，在（1）中发现的一种新型MAP4K结合蛋白是果蝇ROL的哺乳动物同源物，也是TNIK的磷酸化靶蛋白。该分子与DLG1的PDZ结构域结合，DLG1的PDZ结构域是一种参与细胞极性和细胞细胞粘附的肿瘤抑制基因产物。 DLG1在上皮细胞中的细胞间粘附部位积聚，但是在（2）中的分析中，该分子还与RAP2，TNIK和DLG1共定位于鳞状细胞癌细胞系的细胞间粘附部位。在这些癌细胞中，TNIK的过表达显示细胞 - 细胞粘附和细胞极性的丧失。（3）我们开始为Rap2a，b，c和tnik创建有条件的淘汰小鼠。 RAP2B作为种系传输小鼠和野生型小鼠幼崽获得了异群。目前，通过与有条件敲除之前的整个身体中表达CRE重组酶的小鼠交配来创建无效小鼠。 RAP2A，C和TNIK也正在进行工作。此外，由于没有与RAP2A，B和C高度同源的抗体，因此没有可以区分的抗体，因此使用C末端区域获得了抗溶剂，该抗体是通过抗原和特定抗体的C-末端区域获得的，并且通过亲和纯化制备了特定的抗体。