植物RNAウイルスのキャップ非依存性翻訳と時間的発現制御に関わる植物因子の同定

植物 RNA 病毒帽独立翻译和时间表达控制中涉及的植物因子的鉴定

• 批准号: 17026018
• 负责人: 奥野 哲郎
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17026018/
• 关键词: ウィルス; RNA; 植物; キャップ非依存性翻訳; 翻訳因子; RNA複製; RNAサイレンシング; RNA複製酵素; ウイルス

Red clover necrotic mosaic virus(RCNMV)の翻訳・複製に関わる宿主因子とウィルス因子を同定するために必要なin vitro翻訳・複製系(BYL)をKomoda et al.(PNAS 2004)の方法により調製した。BYLはin vivoにおけるRCNMVのキャップ非依存的翻訳とRNA複製(今のところはマイナス鎖合成)を再現できることを明らかにした。RCNMV RNA1のキャップ非依存性翻訳機構においてはRNA1の3'非翻訳領域(UTR)に存在するSL1を含む3'TE-DR1が必須であり、RNA1の3'-UTR(RC1-3'-UTR)はキャップ構造とポリ(A)配列の代わりとして機能する。また、RCNMV RNA1からほぼ完全長のRC1-3'-UTRが未知の機構で生成する。RC1-3'-UTRはBYLにおいてRNA1の翻訳活性を阻害した。一方、SL1に変異を持ち、キャップ非依存的翻訳活性を付与出来ないRC1-3'-UTRSLmでは阻害効果がほとんど見られなかった。このことからRC1-3'-UTRはSL1構造特異的に翻訳因子を競合すると考えられた。これらの結果を基に、ストレプトタグをもつRC1-3'-UTRを用いSL1構造に特異的に結合する宿主因子の単離を行っている。しかし、SL1配列に特異的に結合するタンパク質はまだ得られていない。一方、RCNMVのRNA2のキャップ非依存性翻訳はRNA1の翻訳機構とは異なりRNA複製とリンクしていることが分かった。そこで、RRCNMVの複製酵素成分であるp27タンパク質(p27)にェピトープタグを付け(p27-TEP)、RNA複製に関わる宿主因子の免疫学的手法による単離を同時に試みている。現在、p27-TEPに特異的に結合するタンパク質としてHSP70を得ている。RRCNMVのRNA複製複合体形成はRNAサイレンシングの抑制とも密接にリンクしているため、本手法による宿主因子の単離同定は、RNAサイレンシング、翻訳、複製ネットワークの解明につながることが期待される。

按照 Komoda 等人的方法 (PNAS 2004) 制备了鉴定参与红三叶草坏死花叶病毒 (RCNMV) 翻译/复制的宿主和病毒因子所必需的体外翻译/复制系统 (BYL)。我们证明，BYL 可以在体内重现 RCNMV 的帽独立翻译和 RNA 复制（目前是负链合成）。在 RCNMV RNA1 的帽独立翻译机制中，RNA1 3'非翻译区 (UTR) 中含有 SL1 的 3'TE-DR1 是帽结构和 Poly(A) 阵列的替代品。此外，几乎全长的 RC1-3'-UTR 是通过未知机制从 RCNMV RNA1 生成的。 RC1-3'-UTR 抑制 BYL 中 RNA1 的翻译活性。另一方面，在 RC1-3'-UTRSLm 中几乎没有观察到抑制作用，RC1-3'-UTRSLm 具有 SL1 突变，不能赋予帽独立的翻译活性。这表明 RC1-3'-UTR 以 SL1 结构特异性方式竞争翻译因子。基于这些结果，我们使用链球菌标记的 RC1-3'-UTR 来分离特异性结合 SL1 结构的宿主因子。然而，目前尚未获得与SL1序列特异性结合的蛋白质。另一方面，与 RNA1 的翻译机制不同，RCNMV RNA2 的帽独立翻译被发现与 RNA 复制相关。因此，我们将表位标签（p27-TEP）附加到p27蛋白（p27）（RRCNMV的复制酶成分）上，同时尝试通过免疫学方法分离参与RNA复制的宿主因子。目前，HSP70已作为与p27-TEP特异性结合的蛋白质而获得。由于 RRCNMV RNA 复制复合物的形成与 RNA 沉默的抑制密切相关，因此使用该方法分离和鉴定宿主因子有望阐明 RNA 沉默、翻译和复制网络。

项目成果

温度依存性翻訳制御ポリヌクレオチド

温度依赖性翻译控制多核苷酸

• 发表时间: 2005

Multiple contributions of peroxisomal metabolic function to fungal pathogenicity in Colletotrichum lagenarium

• DOI: 10.1128/aem.00988-06
• 发表时间: 2006-09-01
• 期刊: APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY
• 影响因子: 4.4
• 作者: Asakura, Makoto;Okuno, Tetsuro;Takano, Yoshitaka
• 通讯作者: Takano, Yoshitaka

Downregulation of the NbNACa1 gene encoding a movement-protein-interacting protein reduces cell-to-cell movement of Brome mosaic virus in Nicotiana benthamiana.

• DOI: 10.1094/mpmi-20-6-0671
• 发表时间: 2007-05
• 期刊: Molecular plant-microbe interactions : MPMI
• 作者: M. Kaido;Yosuke Inoue;Yoshika Takeda;K. Sugiyama;A. Takeda;M. Mori;A. Tamai;T. Meshi;T. Okuno;K. Mise

Recent Advances in RNA Virus Replication.(Edited by K.L.Hefferon.)

RNA 病毒复制的最新进展（K.L.Hefferon 编辑）

• 发表时间: 2006
• 作者: Okuno;T.;Mizumot;H.
• 通讯作者: H.

Cheracterization of Striped jack nervous necrosis virus subgenomic RNA3 and biological activities of its encoded protein B2

条纹杰克神经坏死病毒亚基因组RNA3的鉴定及其编码蛋白B2的生物学活性

• 发表时间: 2005
• 期刊: J.Gen.Virol. 86
• 作者: Iwamoto;T. et al.
• 通讯作者: T. et al.