Development of adenovirus vectors and expression systems aiming cancer therapy

开发针对癌症治疗的腺病毒载体和表达系统

基本信息

批准号：
17016014
负责人：
SAITO Izumu
金额：
$ 82.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

Aiming gene therapy for "unvisible cancer" such as disseminating or transferring malignant microtumors, we developed a "single-type, cancer-specific adenovirus vector with high-level expression" possessing cell specificity and high expression efficiency. For addition of high specificity, we used a cancer-specific promoter. Construction methods of two vector systems, a "stuffer-deletion type" and a novel "excisional-expression type", were established. Each system contains two expression units: a "switch unit" expressing Cre under the control of a cell-specific promoter with very low activity, and a "target unit" expressing under the control of very high activity depending on the Cre activity. During the process, it was found that Cre was expressed at a leak and influenced on production of the purpose vector. Therefore, we produced and screened dominant negatives and shRNA against Cre. Using them, we succeeded in the development of high-purity production of the "excisional-expression type" vector. Because the vector established here showed high expression efficiency selectively to cancer cells, we then established a model muse system for examining effective treatment to disseminated cancers. In addition, we also analyzed RMCE (recombinase-mediated cassette exchange) reaction of Cre and FLP, and succeeded in establishment of novel production method, which enabled us to produce many vectors simultaneously.

针对“不可观察的癌症”的基因治疗，例如传播或转移恶性微型营养物，我们开发了一种具有高级表达的单型，癌症特异性腺病毒载体的“具有细胞特异性和高表达效率”。为了添加高特异性，我们使用了癌症特异性启动子。建立了两种矢量系统的构建方法，一种“填充缺失类型”和一种新颖的“弹性表达类型”。每个系统都包含两个表达单元：一个“开关单元”在控制启动子的控制下表达CRE，其活性非常低，并且根据CRE活性而在非常高的活性控制下表达的“目标单元”。在此过程中，发现CRE是在泄漏中表达的，并影响了目的矢量的生产。因此，我们对CRE产生并筛选了主要的负面因素和shRA。使用它们，我们成功地开发了“ Escision-Excression类型”向量的高纯度生产。由于此处建立的媒介对癌细胞有选择地表现出高表达效率，因此我们建立了一个模型Muse系统，用于检查有效的传播癌症治疗方法。此外，我们还分析了CRE和FLP的RMCE（重组酶介导的盒式交换）反应，并成功地建立了新型生产方法，这使我们能够同时产生许多矢量。

项目成果

期刊论文数量（66）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Construction of "Humanized" FLP Recombinases Aiming for Efficient Generation of Helper-Dependent Adenovirus Vector

旨在高效生成辅助依赖性腺病毒载体的“人源化”FLP 重组酶的构建

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
近藤小貴、鐘ヶ江裕美、斎藤泉;他
通讯作者：
他

マウスES細胞へのアデノウイルスベクター高効率感染法及びFLP発現アデノウイルスを用いた簡便なコンディショナルノックアウトマウス作出法の検討

研究用腺病毒载体高效感染小鼠 ES 细胞的方法以及使用表达 FLP 的腺病毒产生条件敲除小鼠的简单方法

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
0
作者：
近藤小貴、鐘ヶ江裕美、斎藤泉;他
通讯作者：
他

Improvement of excisional expression adenovirus vector with tissue-specific, high-level expression

切除表达腺病毒载体的改进，具有组织特异性、高水平表达

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
裴崢、近藤小貴、斎藤泉、鐘ヶ江裕美;他
通讯作者：
他

K. A database of recombinant viruses and recombinant viral vectors available from the RIKEN DNA bank.

K. RIKEN DNA 库提供的重组病毒和重组病毒载体数据库。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J Gene Med 7
影响因子：
0
作者：
Ugai H;Murata T;Nagamura Y;Ugawa Y;Suzuki E;Nakata H;Kujime Y;Inamoto S;Hirose M;Inabe K;Terashima M;Yamasaki T;Liu B;Nakade K;Pan J;Kimura M;Saito I;Hamada H;Obata Y;Yokoyama K.
通讯作者：
Yokoyama K.

Characterization of FLPRecombinase Using Adenovirus Vector and application for Gene Regulation in Mammalian Cells

使用腺病毒载体表征 FLP 重组酶及其在哺乳动物细胞基因调控中的应用