蛋白質フォールディングにおけるフォールディング・エレメントの役割

折叠元件在蛋白质折叠中的作用

• 批准号: 16041248
• 负责人: 新井 宗仁
• 金额: $ 8万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16041248/
• 关键词: 蛋白質; フォールディング; 反応速度論; ジヒドロ葉酸還元酵素; 構造形成能; 安定性; 自己組織化; 折りたたみ; フォールディング・エレメント

1.蛋白質がfoldableであるための必要条件の一つは、全フォールディング・エレメント(FE)の存在である。これに加えてFEが互いに連結されていることも必要条件の一つであることを示した。一方、FEは非局所的なFE間相互作用において重要な役割を果たすことが示された。したがって蛋白質がfoldableとなるための必要条件は「全FE間相互作用が効率的に実現されること」と言い換えられる。2.FE間相互作用の効率的実現のための条件探索を目的として、ジヒドロ葉酸還元酵素(DHFR)のFEシャフリング実験を行った結果、様々なFE連結順序の場合にDHFRがfoldableとなることが示された。また、FE間のリンカー配列とその長さについては、FE間相互作用を妨げない範囲において可変であることが示された。3.連続フローX線溶液散乱法を用いてDHFRのFE間相互作用の形成過程を調べた結果、300マイクロ秒以内に慣性半径23Aの中間体を形成すること、および、その後10ミリ秒までの間に大きな構造変化はないことが示された。また、蛍光エネルギー移動法と連続フロー時間相関一光子計測法を組み合わせて測定した結果、30マイクロ秒以内に分子サイズがコンパクトになること、および、100マイクロ秒の時定数を持った小さな構造変化の存在を見出した。4.様々な蛋白質の折り畳み中間体が持つ分子サイズや二次構造などの特徴を統計的に調べた結果、中間体の構造は、天然状態における構造特性と強い相関を持つことが示唆された。5.蛋白質のFE領域を同定する際には、N末端とC末端を適切なリンカーで連結させる必要がある。新規な末端連結法としてシアノシステインを用いた方法を開発し、DHFRを環状化することによって、機能を損なわずに蛋白質を安定化できることを示した。

1。蛋白质可折叠的要求之一是存在所有折叠元件（FES）。另外，已经证明FES将FES链接在一起是必要条件之一。另一方面，FE已被证明在非本地FE-FE相互作用中起着重要作用。因此，可以将蛋白质折叠的必要条件重塑为“有效地实现所有FE之间的相互作用”。 2.Fe 间相互作用の效率的実现のための条件探索を目的として、ジヒドロ叶酸还元酵素（DHFR）のFefe fe dhfr dhfrableとなることが示された。となることが示された。此外，FES及其长度之间的链接序列在不干扰FES之间的相互作用的范围内显示出可变。 3. x x x dhfr fe 300マイクロ秒以内に惯性半径300マイクロ秒以内に惯性半径13Aの中间体を形成すること、および、その后10ミリ秒までの间に大きな构造変化はないことが示された。また、蛍光エネルギー移动法と连続フロー时间相关一光子计测法を组み合わせて测定した结果、30 マイクロ秒以内に分子サイズがコンパクトになること、および、100マイクロ秒の时定数を持った小さな构造変化の存在を见出した。4。4. 様々な蛋白质の折り畳み中间体が持つ分子サイズや二次构造などの特徴を统计的に调べた结果、中间体の构造は、天然状态における构造特性と强い相关を持つことが示唆された。5。当识别蛋白质的Fe区域时，有必要将N末端和C端连接到适当的接头。

项目成果

Oligomeric Hsp33 with enhanced chaperone activity : Gel-filtration, cross-linking and SAXS analysis

具有增强伴侣活性的寡聚 Hsp33：凝胶过滤、交联和 SAXS 分析

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Biological Chemistry 279(53)
• 作者: Akhtar;M.W. et al.
• 通讯作者: M.W. et al.

Localized nature of the transition-state structure in goat α-lactalbumin folding

山羊 α-乳清蛋白折叠中过渡态结构的局部性质

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Molecular Biology 341(2)
• 作者: Saeki;K;Arai;M. et al.
• 通讯作者: M. et al.

Helical and expanded conformation of equine beta-lactoglobulin in the cold-denatured state.

马β-乳球蛋白在冷变性状态下的螺旋和扩张构象。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Journal of Molecular Biology 350(2)
• 作者: Y.Horie;A.Suzuki et al.;堀江 泰夫 ほか;新井 宗仁;Kuwajima et al.;新井 宗仁;Nakao et al.;Yamada et al.
• 通讯作者: Yamada et al.

Characterization of kinetic folding intermediates of recombinant canine milk lysozyme by stopped-flow circular dichroism.

• DOI: 10.1021/bi050082
• 发表时间: 2005-05
• 期刊: Biochemistry
• 影响因子: 2.9
• 作者: Masaharu Nakao;K. Maki;M. Arai;T. Koshiba;K. Nitta;K. Kuwajima

タンパク質のフォールディング・エレメント

蛋白质折叠元件

• 发表时间: 2005
• 期刊: 生物物理 45(3)
• 作者: Y.Horie;A.Suzuki et al.;堀江 泰夫 ほか;新井 宗仁;Kuwajima et al.;新井 宗仁;Nakao et al.;Yamada et al.;新井 宗仁
• 通讯作者: 新井 宗仁