特異的γセクレターゼ阻害剤を用いた活性型プレセニリン複合体の調節機構の解析

特异性γ-分泌酶抑制剂分析活化早老素复合物的调控机制

• 批准号: 16015243
• 负责人: 池内 健
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16015243/
• 关键词: アルツハイマー病; プレセニリン; セクレターゼ; プロテアーゼ; 阻害剤; 遷移状態アナログ

1.分子プローブとしての特異的γセクレターゼ阻害剤の作成γセクレターゼを選択的に阻害する遷移状態アナログ型阻害剤,L-685,458にbenzophenoneおよびbiotinを付加した阻害剤(L-852,505)およびBODIPY-FLを付加した阻害剤(BODIPY-L658,458)を作成した.2.L-852,505を用いたプレセニリン(PS)複合体の生化学的解析野生型PS1安定発現株にL-852,505を作用させ,阻害剤依存性に光架橋したタンパクをSDS-PAGEにて分離後,PS1特異抗体で免疫ブロットしたところ,断片型PS1のみを検出した.家族性Alzheimer病関連PS1変異(ΔE9)では,野生型同様にL-852,505によるラベリングを認めたが,機能喪失型PS1変異(D385A)ではラベリング効果を認めなかった.PS複合体の構成因子であるnicastrin, APH-1, PEN2を共発現した細胞(ANPP)ではPS1断片のラベリング効果の著明な亢進を認め,活性型PS1複合体の形成増加が示唆された.3.BODIPY-L658,458を用いたPS複合体の免疫組織学的解析ANPP細胞においてBODIPY-L658,458染色を行うと,その蛍光は細胞表面からearly endosomeに検出した.内在性PS発現細胞ではBODIPY-L658,458の蛍光強度は低かった,しかしながら,L-852,505を界面活性剤非存在下で培養細胞に作用させ,光架橋後,抗biotin抗体で免疫染色を行ったところ細胞表面に蛍光を検出し,内在性レベルでも細胞表面にPSを検出した.

1。创建特定的γ-分泌酶抑制剂作为分子探针。 We have created inhibitors with benzophenone and biotin added to L-685,458, a transition-state analog inhibitor that selectively inhibits γ-secretase inhibitors We have created inhibitors with benzophenone and biotin (L-852,505) and inhibitors with BODIPY-FL added (BODIPY-L658,458). 2。使用L-852,505的生物化学分析（PS）复合物对野生型PS1 L-852,505的稳定表达在菌株上反应，并通过SDS-PAGE分离抑制剂依赖性的光叠链链接蛋白，并与PS1特异性抗体的PS1和PS1特异性PS1进行了免疫，并被散布。在家族性阿尔茨海默氏病相关的PS1突变（ΔE9）中，以与野生型相同的方式观察到L-852,505的标记，但是功能丧失的PS1突变（D385A）并未显示出标记效应。 Nicastrin，PS复合物的组成因子。共表达APH-1和PEN2（ANPP）的细胞显示PS1片段的标记效应显着增加，这表明活性PS1复合物的形成增加了3。当ANPP细胞中的Bodipy-L658和458染色的Bodipy-L658和458染色的Bodipy-L658和458染色的Bodipy-L658和458时，使用BODIPY-L658,458对PS复合物进行免疫组织学分析，在ANPP细胞中，从细胞表面检测到荧光的早期内体。在表达内源性PS的细胞中，BODIPY-L658和458的荧光强度较低。然而，在没有表面活性剂的情况下，将L-852,505应用于培养的细胞上，在光叠链接链接后，当用抗生物素抗体进行免疫染色时，在细胞表面检测到荧光，甚至在内源水平上也检测到在细胞表面上在细胞表面上检测到PS。

项目成果

病気はどこまでゲノムで決められているか:痴呆

痴呆症在多大程度上是由基因组决定的？

• 发表时间: 2004
• 期刊: Molecular Medicine 41・増刊号
• 作者: 菊池修;片山統裕;辛島彰洋;中尾光之;池内 健;池内 健;池内 健
• 通讯作者: 池内 健

プレセニリン

早老素

• 发表时间: 2005
• 期刊: Dementia Japan (印刷中)
• 作者: 菊池修;片山統裕;辛島彰洋;中尾光之;池内 健
• 通讯作者: 池内 健

アルツハイマー病:β・γセクレターゼ阻害剤

阿尔茨海默病：β/γ分泌酶抑制剂

• 发表时间: 2004
• 期刊: BRAIN MEDICAL 16・1
• 作者: 菊池修;片山統裕;辛島彰洋;中尾光之;池内 健;池内 健
• 通讯作者: 池内 健