内分泌攪乱物質のProteasomeによる核内受容体turnoverに及ぼす影響

内分泌干扰物对蛋白酶体核受体周转的影响

基本信息

批准号：
14042236
负责人：
増山寿
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14042236/
关键词：
nuclear receptor proteasome turnover endocrine disruptor estrogen receptor

项目摘要

本研究では,核内受容体特にEDCの作用機序に深く関わっているestrogen receptor(ER)のturnoverへのEDCの影響について調べ,EDCの新しい作用機序として受容体のturnover即ち安定性への影響を検討している.我々はVDRのAF-2領域と結合する蛋白をscreeningして得られたcloneの一つ,suppressor for gal-1(SUG1)がVDRやPXRのproteasomeを介した受容体蛋白分解に関与していることを報告してきた.今年度はER蛋白分解機構でのSUG1の役割と生殖臓器での発現を検討した.まずYeast two-hybrid法を用いてERとSUG1の結合を検討すると,SUG1はリガンド依存性にERαやERβと結合した.次にER発現細胞にproteasome阻害剤を投与したところERαやERβ蛋白分解が抑制された.さらにSUG1を過剰発現させてERを介した転写への影響を検討すると,SUG1によりERαやERβによる転写活性は抑制された.またSUG1過剰発現細胞ではリガンド存在下でERαとERβ共にproteolytic fragmentが発現しており,polyubiquitin affinity beadsを用いたpull down assayではリガンド存在下でpolyubiquitin化したERαとERβの発現を認めた.エストロゲン様作用物質のBisphenol AはERαとERβ両方のリガンドであるがERβ-SUG1結合を誘導せず,Bisphenol Aの存在下ではSUG1過剰発現細胞でproteolytic fragmentやpolyubiquitin化したERβは発現しなかった.SUG1は肝臓,小腸の他に子宮や卵巣でも発現を認め,子宮内膜では正常例に比しホルモン剤投与例で強く発現していた.以上よりSUG1はUbiquitin/Proteasomeを介したER蛋白のturnoverに関与していると考えられた.SUG1は生殖臓器にも発現しており,高ステロイドホルモン暴露下の子宮内膜で発現が増加していたことから生殖機能においても何らかの役割を果たしていると考えられた.

在这项研究中，我们研究了EDC对EDC作用机理的核受体（ER）周转的影响，并研究了对受体转移或稳定性的影响，作为EDC的新作用机制。我们报道说，通过筛选与VDR的AF-2区域结合的蛋白获得的GAL-1（SUG1）的抑制剂参与了VDR和PXR的蛋白酶体介导的受体蛋白水解。今年，我们研究了SUG1在ER蛋白水解机制中的作用及其在生殖器官中的表达。首先，使用两个杂交方法检查ER和SUG1时的酵母，sug1依赖于ERα和ERβ的配体依赖于配体。接下来，将蛋白酶体抑制剂用于表达ER的细胞以抑制ERα和ERβ蛋白水解。此外，当SUG1过表达并检查了对ER介导的转录的影响时，SUG1抑制ERα和ERβ的转录活性。此外，在SUG1过表达的细胞中，在存在配体的情况下在ERα和ERβ中表达蛋白水解片段，并在使用多偶联蛋白亲和力珠的下拉测定中表达了多泛素化的ERα和ERβ的表达，在存在配体的情况下。双球醇，一种雌激素样剂，雌激素样剂。尽管A是ERα和ERβ的配体，但它并未诱导ERβ-SUG1结合，并且在Bisphenol A的存在下，在SUG1过表达的细胞中未表达蛋白水解片段和多泛素化的ERβ。 SUG1在肝脏，小肠以及子宫和卵巢中表达，与正常情况相比，在激素药物的子宫内膜中表达了强烈表达。从上面，人们认为SUG1参与了通过泛素/蛋白酶体的ER蛋白质参与。 SUG1在生殖器官中也表达，在高类固醇激素暴露下，子宫内膜中的表达增加，因此被认为在生殖功能中起作用。