植物におけるPTGS反応系の解析

植物PTGS反应体系分析

• 批准号: 14035228
• 负责人: 飯 哲夫
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14035228/
• 关键词: 転写後ジーンサイレンシング; RNAサイレンシング; 植物ウイルス; 複製酵素; PTGSサプレッサー

1.トマトモザイクウイルス(ToMV)の弱毒株の解析から,野生型複製酵素が転写後型ジーンサイレンシング(PTGS)のサプレッサーであることを予想していたが,アグロインフィルトレーションアッセイによりこれを証明した.また,弱毒株に見られた変異は,複製酵素の示すサプレッサー活性そのものを完全に失活させるものではなく,感染細胞内での複製酵素の安定性や局在性に変化をもたらすものであることが示唆された.2.サプレッサーの作用点について,種々の組み換えウイルスを調製して解析した.その結果,ToMVのサプレッサーは,サイレンシングに伴い生じる21〜25塩基のsiRNA合成以降のステップで働くこと,既に形成されている配列特異的なRNA分解酵素複合体(RISC)の活性は阻害しないことが明らかとなった.これから,ToMVのサプレッサーは配列特異的なRNA分解酵素複合体の新規形成を阻害すると考えられた.3.タバコ培養細胞から,試験管内でのタンパク合成活性があり,非特異的なRNA分解酵素活性が極めて低い分画を調製する方法を確立した.この画分に含まれる種々の酵素活性を解析した結果,2本鎖RNAを切断するDicerの活性を認めた.この活性により長い2本鎖RNAは約21-23塩基と,約25塩基の2種のsiRNAに切断された.このパターンは,PTGSが起こっているタバコで認められるsiRNAのパターンと一致している.この系を用いることにより,サプレッサーの作用機作を試験管内で証明することが可能と考えられる.4.ToMVの感染葉におけるsiRNA生成の解析から,奇形を伴う病徴発現においては,サプレッサーがmiRNA経路の阻害をしていることが予想された.

1。对番茄马赛克病毒（TOMV）的分析预测，野生型重复的酶是一种细分 - 型基因沉默（PTG）供应商，但通过Agrin Filt cormation证明了这一点。中毒并不是通过重复的酶固定的，但是在被感染的细胞中引起了重复的酶的稳定性和定位，在siRNA合成的21至25个基础基础之后，tomv us suptors已被沉默产生ON TOMV补充剂是阵列特异性RNA酶复合物的新形成。 ，并且由于分析各种酶的活性，准备绘画的方法很少21-23个基部和25个模式与使用该系统的sirna模式相匹配在被感染的TOMV叶片中产生的siRNA产生有望抑制畸形病理中的miRNA途径。

项目成果

Hagiwara Y. et al.: "Subcellular localization of host and viral proteins associated with tobamovirus RNA replication"EMBO J.. 22. 344-353 (2003)

Hagiwara Y.等：“与烟草花叶病毒RNA复制相关的宿主和病毒蛋白的亚细胞定位”EMBO J.. 22. 344-353 (2003)

Yamanaka et al.: "Complete inhibition of tobamovirus multiplication by simultaneous mutations in two homologous genes"J. Virol.. 76. 2491-2497 (2002)

Yamanaka 等人：“通过两个同源基因的同时突变完全抑制烟草病毒的增殖”J.