細胞周期制御機構の破綻と悪性腫瘍

细胞周期控制机制的破坏与恶性肿瘤

基本信息

批准号：
13216069
负责人：
南康博
金额：
$ 20.48万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13216069/
关键词：
リンパ球 H-Ras c-Myc HIF1 DNA損傷応答癌抑制遺伝子産物 Chk2キナーゼ Wip1ホスファターゼ

项目摘要

本年度の研究においては、まず癌遺伝子産物であるH-Ras(H-RasV12)とc-Mycの協調作用を解析する目的で、これらの分子を単独あるいは両者を構成的に発現するリンパ球系細胞株を用いて、細胞接着能及び低酸素状態に対する感受性を比較検討した。その結果、(1)H-Ras, c-Myc両者を発現する細胞株においては、ラミニンの受容体であるalpha6インテグリンが(主に転写レベルでの制御により)発現抑制されており、実際ラミニン接着性が殆ど消失していること、また(2)この細胞株では、レポーターアッセイの結果HIF1の転写活性化能が顕著に亢進していること、また実際塩化コバルトにより引き起こされた低酸素状態によるアポトーシス誘導に対して耐性になっていることが見出された。次に、癌抑制遺伝子産物であるChk2キナーゼのDNA損傷時における機能を明らかにする目的で、既にyeast two hybridスクリーニングによりChk2と会合することが示唆されていたWip1ホスファターゼとChk2キナーゼとの物理的・機能的連関について、特にリン酸化・脱リン酸化による制御を念頭に置いて、細胞生物学的・生化学的解析を行った。その結果、Chk2とWip1が会合し、実際両分子が核内において共局在することが見出された。また、DNA損傷時にChk2のThr68が(ATMキナーゼまたは自己リン酸化により)リン酸化を受けることがその活性化に重要であることが知られていたが、Wip1がリン酸化を受けたThr68を脱リン酸化することが明らかとなった。さらに、DNA損傷時の細胞応答におけるChk2キナーゼの多彩な機能を解明する目的で、体系的なyeast two hybridスクリーニングを行い、Chk2と会合しうる分子として新たにPAPSS1、AF10、UMP/CMPキナーゼを同定することに成功した。

在今年的研究中，单独构成这些分子或两者的淋巴细胞由分析癌症基因的配位（H-RASV12）和C-MYC的目的组成。。结果，（1）在表达H-RAS和C-MYC的细胞储备中，raminin受体α6整体蛋白被抑制（主要是通过控制转录水平），实际上是层粘连蛋白的粘附力。（2）在该细胞库存中，报告基因测定的后果显着增强了HIF1的转移激活能力，实际上是由于氯化钴蛋白引起的低氧态而产生的。接下来，为了澄清CHK2激酶的功能，这是CHK2激酶的癌症抑制，WIP1 Hosfatase和CHK2激酶，已经建议通过最后两种混合筛选来满足CHK2。进行，特别是在功能联系中，尤其是在控制磷酸化和磷酸化方面。结果，满足CHK2和WIP1，发现两个分子实际上都位于核中。众所周知，在DNA损伤过程中，CHK2的THR68（由于ATM激酶或自氧化）对于其激活很重要，但是THR68的re悔率很明显。 Furthermore, in order to elucidate the various functions of chk2 kinase in cell response in the case of DNA damage, systematic YEAST Two Hybrid screening is performed, and new Papsss1, AF10, UMP/CMP Kinase is identified as a molecule that can meet CHK2.我成功地做了。