シナプス強化の過程における特異的タンパク合成の解析
突触强化过程中特异性蛋白质合成分析
基本信息
- 批准号:09260211
- 负责人:
- 金额:$ 0.96万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
ラット大脳からシナプス後肥厚部(PSD)を単離し,そこからRNAを抽出した.まずcDNAを作り、それをスターティングマテリアルとして,アイソトープ標識デオキシヌクレオチド存在下でPCRを行った.得られたPCR産物を電気泳動で分離後,オートラジオグラフィーにて検出,同定した.上記で用いた乾燥ポリアクリルアミドゲルから,個々のバンドを正確に切り取り,ゲル内に含まれる約650種のDNAを抽出・回収し,アガロースゲル電気泳動で精製した.こうして得られたDNAのうち,現在までに約150種ほどの塩基配列を決定した.DNAデータベースによるホモロジー検索の結果,23種類の遺伝子が既知のものであった.既にdendriteにmRNAが局在することが明らかにされているものの中ではMAP2が検出されていたが,他のものはそのmRNAのdendriteへの局在は報告されていないものであった.今回新たに未知の遺伝子として,しかもそのmRNAがdendriteに局在する可能性のあるものとして108個見つかった.我々はそれらを仮にDem gene(遺伝子産物はDem protein)と名付けた.それらのうち,比較的長いものの中から2種を選んで,in situ hybridization(digoxygenin法)を行いmRNAが本当にdendriteに局在するかどうかについての検証を行った.Dem-1は正常のアダルトラット脳の神経細胞に広く分布していた.さらに,カイニン酸による痙攣誘発後4時間の脳ではDem-1の発現は顕著に誘導されていた.その際,大脳皮質や海馬の錐体細胞においてはdendrite内に明らかなmRNAの発現を観察した.Dem-2においては,カイニン酸刺激前のラット脳にはmRNAを検出できなっかたが,カイニン酸刺激後4時間の大脳皮質,海馬の神経細胞において著しいmRNAの発現誘導を観察した.その場合にもやはり,発現は神経細胞の細胞体ばかりでなくdendriteにも観察された。これまでの結果から考えると,dendriteやPSD近傍に局在する遺伝子やタンパク質を同定するための方法として,我々の方法は十分に有効なものであると確認された.今後は,残りの約450種の遺伝子の塩基配列決定と,塩基配列決定のなされたものについてはin situ hybridizationやNorthern blotによる解析,さらに,full lengthを含む遺伝子のクローニングを進め,タンパクとしての機能を明らかにする計画である.
从大鼠脑大脑中分离出突触后增厚(PSD),并从中提取RNA。首先,制备cDNA,并在同位素标记的脱氧核苷酸作为起始材料的情况下进行PCR。通过电泳分离获得的PCR产物,并通过放射自显影检测和鉴定。精确地从上面使用的聚丙烯酰胺凝胶中切出单个条带,并提取并收集凝胶中包含的大约650种DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳纯化。然后将所得的DNA承受糖。迄今为止,已经确定了大约150个基因。使用DNA数据库的同源性搜索表明已知23个基因。 MAP2已经被发现在被揭示为树突的人中发现,但是其他人没有关于mRNA定位到树突的报道。我们发现了108个新的未知基因,并且mRNA可以定位于树突。我们决定将其用作DEM。我们命名了基因(基因产物是DEM蛋白)。这些物种中的两个是从相对较长的物种中选择的,我们原位研究了mRNA是否通过杂交定位于树突(二氧蛋白法)。 DEM-1广泛分布在正常成年大鼠大脑中的神经元中。此外,在大脑中四个小时诱导海藻酸诱导后,DEM-1的表达显着诱导。目前,我们观察到海马脑皮质和锥体细胞中树突中的明显mRNA表达。在DEM-2中,在海藻酸刺激之前无法在大鼠脑中检测到mRNA,但是在海藻酸刺激后4小时,大脑皮层和海马神经元中的mRNA表达诱导显着。在这种情况下,不仅在神经细胞的细胞体中,而且在树突中也观察到表达。考虑到迄今为止的结果,我们的方法已被证实是鉴定在树突和PSD附近定位的基因和蛋白质的方法足够有效的。将来,我们计划进行其余450个基因的测序,分析已通过原位杂交和北印迹测序的基因,以及包含全长的基因的克隆以阐明其作为蛋白质的功能。
项目成果
期刊论文数量(8)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Suzuki,T.: "Localization of α-internexin in the postsynaptic density of the rat brain." Brain Res.765. 74-80 (1977)
Suzuki, T.:“α-internexin 在大鼠大脑突触后密度中的定位。”74-80 (1977)。
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
鈴木龍雄: "Bio Science.用語ライブラリー・脳・神経" 羊上社, 248ページ(2ページ分担) (1997)
铃木龙夫:“生物科学。术语库/大脑/神经” Hijikamisha,248 页(共享 2 页)(1997 年)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
鈴木龍雄: "シナプスのMAPキナーゼ系" 生体の科学. 48. 97-100 (1977)
Tatsuo Suzuki:“突触 MAP 激酶系统”生物科学 48. 97-100 (1977)。
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Suzuki,T.: "Presence of both NF-KB-like and IKB-like immunoreactivities in postsynrptic densities in the rat brain." Neurorepoot. 8. 2931-2935 (1977)
Suzuki,T.:“大鼠大脑突触后密度中同时存在 NF-KB 样和 IKB 样免疫反应性。”
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