光形態形成に関わるYPT/rabタンパク質の機能の解析

YPT/rab蛋白参与光形态发生的功能分析

基本信息

批准号：
08262208
负责人：
佐々木幸子
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08262208/
关键词：
光形態形成小胞輸送エンドウ CTP結合タンパク質伸長

项目摘要

光形態形成に関わるTPT/rab蛋白質の機能を解析するために以下の実験を行い、新しい知見を得た。本研究ではエンドウのpra2 proteinと名ずけたYPT/rab蛋白質を対象としている。この蛋白質は暗所生育エンドウの茎の成長領域に多く発現し、光が当たると消失するので、発芽直後の実生の光形態形成に関わると推測されている。(1)pra2 proteinは伸長する茎の膜画分にある。どの膜画分に局在するか以下の方法で調べた。1、in situ hybridizationで細胞特異的分布を調べた。予測どうり、mRNAは伸長部位の小さな細胞に分布していた。2、細胞膜分画で細胞内のどの膜にあるか調べた。ゴルジ膜画分に多かった。しかし、細胞膜画分にも多く、更に詳細に調べなければならない。3、免疫電子顕微鏡法で局在を調べたが、本タンパク質がごく微量(0.01%)のためか、信頼出来る結果は得られなかった。(2)pra2 proteinを過剰発現させた形質転換タバコを作成した。T0、T1の形態、及び暗所生育実生形態に、変化は見られなかった。mRNA量はエンドウ茎伸長部位よりも多く発現していても、pra2 proteinはエンドウ茎伸長部位と同じ程度しかなかった。多分不必要な蛋白質であるため、分解されるのであろう。(3)GDP型またはGTP型GST-pra2 fusion protein columnを用いて、これと特異的に相互作用する分子を探した。エンドウ暗所茎伸長部位抽出液をこのカラム流し、探索した。可溶性画分に1つと不溶性画分に1つの蛋白質をみつけた。今後、この蛋白質の正体を明らかにしていきたい。

进行了以下实验，以分析与光瘤形成相关的TPT/RAB蛋白的功能，并获得了新知识。在这项研究中，靶向pRA2蛋白的YPT/RAB蛋白。假定该蛋白通常在暗豌豆的茎的生长区域中表达，并在光击中时消失，因此它与发芽后立即形成了种子的形成有关。（1）PRA2蛋白在扩展的STEM膜绘画中。以下方法是膜绘画所在的位置。 1。原位杂交，检查了细胞特异性分布。预测，mRNA分布在延伸部分的小细胞中。 2。检查细胞膜分裂，其中细胞内部的膜。峡谷膜绘画中有很多。但是，细胞膜部分中有很多，必须对其进行更详细的研究。 3。免疫电子显微镜方法检查了局部区域，但是蛋白质很小（0.01％），因此没有可靠的结果。（2）创建了一种转化的香烟，该香烟表达过多的PRA2蛋白。 T0和T1的形式没有变化，也没有变化的生长形式。即使表达的mRNA量大于末端茎延伸，但PRA2蛋白也仅与胚根茎延伸相同。可能是因为它是不必要的蛋白质而被拆卸的。（3）使用GDP类型或GTP类型GST-PRA2融合蛋白柱，我们搜索了特定的相互作用分子。脱落豌豆的深层茎延伸，并探索提取的部分。发现了一种蛋白质，用于可溶性绘画的一幅不溶性绘画。我想阐明将来这种蛋白质的身份。