糖鎖の分子認識発現機構の特異性解析

糖链分子识别表达机制的特异性分析

• 批准号: 08219217
• 负责人: 碓氷 泰市
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Shizuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08219217/
• 关键词: Enzymatic Synthesis; Transglycosylation; Oligosaccharide Unit; Molecular Recognition; Glycosidase; Glycoconjugate; Glycopolymer; Lectin

本研究は、複合糖質の分子認識に関わる重要オリゴ糖単位を合成するため、グリコシダーゼを触媒素子とし従来では達成し得ない実践的合成プロセスの確立を目指している。合成したオリゴ糖鎖を認識マーカーとして高分子に組み込んだ糖鎖高分子を構築したり、バイオセンサーリガンドと成し、これら糖結合性タンパクとの相互作用の解析から糖鎖認識発現の機作を究明していく。1.前年の成果であるムチン型オリゴ糖鎖I型Galβ1-3GalNAcα-pNPを出発基質としてNocardia orientalis由来β-N-アセチルヘキソサミニダーゼ(β-NAHase)のGlcNAc転移反応を利用し、ムチンII型構造を有する型Galβ1-3〔GlcNAcβ1-6〕GalNAcα-pNP単位の位置選択的酵素合成に成功した。2.上記N.orientalis由来β-NAHaseを用い、N-アセチルラクトサミン(LacNAc)を受容体にGlcNAc転移させたGlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc3糖単位の合成法も開発した。3.ブタ肝臓由来α-L-フコシダーゼを触媒素子としてLacNAc受容体への本酵素のフコシル転移反応を利用し、ヒト血液型エピトープとして存在する共通3糖2'-0-フコシル・ラクトサミン(Fucα1-2Galβ1-4GlcNAc)の合成法を確立した。4.これまでに酵素合成した一連のβ-ガラクトシル2糖を出発原料としてこれらを側鎖に持つ水溶性糖鎖高分子p-アクロイルアミノフェニル重合体を得た。これらを用い、各種レクチンとの相互作用を解析したところ、糖鎖プローブとしての利用の可能性が実証できた。

本研究旨在建立一种实用的合成工艺，使用糖苷酶作为催化元件来合成参与复杂碳水化合物分子识别的重要寡糖单元，这是传统方法无法实现的。我们构建了糖链聚合物，其中合成的寡糖链被整合到聚合物中作为识别标记，或使用它们作为生物传感器配体，并分析与这些糖结合蛋白的相互作用，以确定糖链识别表达的机制。 1.使用前一年的结果的粘蛋白型寡糖链I型Galβ1-3GalNAcα-pNP作为起始底物，诺卡氏菌利用侧柏来源的β-N-乙酰己糖胺酶(β-NAHase)的GlcNAc转移反应，区域选择性酶促合成具有粘蛋白II型结构的Galβ1-3[GlcNAcβ1-6]GalNAcα-pNP单元。成功的。 2. 我们还开发了一种合成 GlcNAcβ1-3Galβ1-4GlcNAc 三糖单元的方法，其中 N-乙酰基乳糖胺 (LacNAc) 使用侧柏衍生的 β-NAHase 通过 GlcNAc 转移到受体上。 3.利用该酶对LacNAc受体的岩藻糖基转移反应，以猪肝来源的α-L-岩藻糖苷酶为催化元件，常见的三糖2'-0-岩藻糖基乳糖胺（Fucα1-2Galβ1-4GlcNAc）的合成方法）。 4.以目前酶法合成的一系列β-半乳糖基二糖为起始原料，得到了以这些为侧链的水溶性糖链聚合物对丙烯酰氨基苯基聚合物。使用它们来分析与各种凝集素的相互作用，我们能够证明它们用作糖链探针的可能性。

项目成果

T.Murata et al.: "Preparation of oligosaccharide units library and its Utilization" Biosci.Biotech.Biochem.in press. (1997)

T.Murata 等人：“寡糖单元文库的制备及其利用”Biosci.Biotech.Biochem.in press。

T.Murata et al.: "Convenient synthesis of α-(1-3)-galactosyl disaccharide β-gly β-glycoside and its analogs as mimic units of mucin-type" J.Biochem.120. 851-855 (1996)

T.Murata 等人：“作为粘蛋白型模拟单位的 α-(1-3)-半乳糖基二糖 β-甘氨酸 β-糖苷及其类似物的便捷合成”J.Biochem.120 (1996)。

T.Usui et al.: "Regioselectivity of β-D-galactosyl-disaccharide formation using the β-D-galactosidase from Bacillus circulans" Carbohydr.Res.285. 29-39 (1996)

T. Usui 等人：“使用来自环状芽孢杆菌的 β-D-半乳糖苷酶形成 β-D-半乳糖基二糖的区域选择性”CarboHydr.Res.285 (1996)。

碓氷泰市: "糖鎖高分子の分子設計と機能発現" 高分子. 45・8. 548-552 (1966)

臼井康：“糖链聚合物的分子设计和功能表达”聚合物45・8（1966）。

T.Murata et al.: "Enzymic synthesis of 3'-0-and 6'-0-N-acetylglucosaminy1-N-acethyllactosaminide glycosides by β-N-acethylhexosaminidase" Biochim.Biophys.Acta. in press. (1997)

T.Murata 等人：“通过 β-N-乙酰氨基己糖苷酶合成 3-0-和 6-0-N-乙酰氨基葡萄糖 1-N-乙酰氨基乳糖苷”，Biochim.Biophys.Acta 出版。