MPF活性化に関るキナーゼカスケード

激酶级联参与MPF激活

• 批准号: 06262201
• 负责人: 山下 正兼
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06262201/
• 关键词: MPF; 卵成熟; cdc2; サイクリンB; MO15; キナーゼカスケード; キンギョ; 細胞分裂周期; MPF; 卵成熟; cdc2; サイクリンB; MO15; キナーゼカスケード; キンギョ; 細胞分裂周期

卵成熟におけるcdc2の活性化に関わるキナーゼカスケードを明らかにするため、以下の2点を調べた。1.cdc2活性化キナーゼMO15の卵成熟過程での挙動キンギョMO15cDNAを大腸菌で発現させ、抗体を作製し、cdc2活性化酵素(T161リン酸化酵素)としてのMO15の機能を調べた。キンギョ未成熟卵抽出液には不活性型cdc2は存在するが、サイクリンBはない。これに大腸菌で作製したサイクリンBを入れると、cdc2のT161がリン酸化され、活性化した。この時、あらかじめ抗体でMO15を抽出液から除いておくと、サイクリンBを入れても、cdc2は活性化しなかった。しかし、ウサギ網状赤血球ライセ-トで作製したMO15を加えると、cdc2の活性化が回復した。キンギョcdk2を基質にした実験より、MO15は未成熟卵ですでに活性化状態にあることがわかった。また、そのタンパク量は卵成熟過程でほとんど変化しなかった。従って、キンギョ卵成熟誘起の最終的引き金になっているのはMO15の活性化ではなく、卵成熟過程でのサイクリンB合成開始であると結論できる。2.cdc2の活性化に関わるMO15以外のキナーゼの発見とその化学的同定キンギョとツメガエル卵成熟過程でMPFの活性化に関わるキナーゼ活性を47種の外来基質を用いて検索した。その結果、(1)MPF活性に先立ち上昇するエラスターゼをリン酸化する活性、(2)第1減数分裂と第2減数分裂の間で一時的に活性の上昇するフォスフォクレアチンをリン酸化する活性を発見した。(1)の活性はMPFの活性化に関わる可能性が、(2)については第1減数分裂と第2減数分裂の移行に関わる可能性があり、いずれの活性もこれまでに報告のないもので、その化学的実体の解明が急がれる。

为了阐明在卵成熟过程中参与Cdc2激活的激酶级联反应，研究了以下两个点。 1。卵成熟过程中Cdc2激活的激酶MO15的行为。在大肠杆菌中表达骨髓MO15 cDNA以产生抗体，并检查MO15作为CDC2激活酶（T161磷酸酶）的功能。 Cdc2的非活性形式存在于未成熟金鱼卵的提取物中，但是没有细胞周期蛋白B。当将大肠杆菌中的细胞周期蛋白B添加到此中时，Cdc2中的T161磷酸化并激活。目前，使用抗体提前从提取物中除去MO15，即使添加了细胞周期蛋白B，也不会激活CDC2。但是，当添加兔网状细胞许可证中产生的MO15时，恢复了CDC2的激活。使用金鱼CDK2作为底物的实验表明，MO15已经在未成熟的卵中激活。此外，蛋白质含量在鸡蛋成熟过程中几乎不会改变。因此，可以得出结论，骨髓卵成熟的最终触发因素不是MO15的激活，而是在卵成熟过程中cylin B合成的启动。 2。使用47个外来底物搜索了参与Cdc2激活的MO15以外的其他参与Cdc2激活的激活及其对MPF激活的激酶活性的化学鉴定。结果，我们发现（1）（1）在MPF活性之前增加的磷酸化弹性酶的活性，以及​​（2）磷酸化磷酸蛋白的活性，从而暂时增加了第一和第二减数分裂之间的活性。 （1）的活性可能参与MPF的激活，但（2）可能参与了第一和第二减数分裂之间的过渡，并且迄今未报告任何活性，因此迫切需要澄清其化学实体。