複製フォ-ク進行の阻止システムと染色体構造

复制叉进展预防系统和染色体结构

• 批准号: 02260209
• 负责人: 堀内 高
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02260209/
• 关键词: 複製フォ-ク; 複製終結点; rDNA; 二次元寒天ゲル電気泳動法

本研究の主題は、大腸菌の複製終結システムが真核生物においても有効に働くか否かを調べること、および真核生物(特に酵母)にも存在すると思われる、類似のシステムの解析である。前者の問題については、SV40DNAの試験管内複製系を用いて調べた。基質のSV40DNAに終結点配列を挿入し、反応液に終結点結合タンパク質を添加したところ、酵素試料として、粗抽出液あるいは精製標品いずれを用いた場合においても、明らかな終結点での複製フォ-ク阻害が観察された。さらに、終結点とその結合タンパク質の複合体は、SV40のlargeT抗原の有するヘリカ-ゼ活性を特異的に阻害することも解った。以上のことから、大腸菌の終結システムが、真核生物の系でも同様に有効であること、複製フォ-クの進行の機構が、原核、真核問わず、基本的には同じであることが強く示唆された。一方酵母内に大腸菌の終結点結合タンパク質をコ-ドする遺伝子を導入、発現させたところ、酵母内にある大腸菌終結配列においても、複製フォ-クの進行が阻害される結果を、予備的ではあるものの得ることができた。もう一つの問題、すなわち酵母における終結様システムの解析は、既に報告のあるrDNA遺伝子内の複製フォ-ク阻害活性部位について解析を進めている。現在まで、その活性測定法を、二次元寒天ゲル電気泳動法を用いて確立し、その活性部位をより狭い頒域に限定しつつある。今後その頒域に結合するタンパク質の検索、同定を試み、真核生物でのフォ-ク阻止システムの全容を明らかにしたい。

这项研究的主题是对类似系统的分析，这些系统被认为存在于本地生物（尤其是酵母）中，因为大肠杆菌的重复结局系统的主题在本地生物体中也有效。使用SV40DNA -in -In -Pipe重复系统检查了前一种问题。当末端阵列插入底物SV40DNA时，即使使用粗提取物或炼油产物作为酶样品，终点结合蛋白也会在反应溶液中添加观察到抑制作用。此外，还可以理解，终点及其结合蛋白复合物特异性抑制了SV40 larget抗原的栖息地。基于上述，大肠杆菌的结尾系统在天然生物的系统中也有效，而重复的焦点的进度机制基本上是相同的。另一方面，当引入和表达酵母中大肠杆菌的终点结合蛋白的基因时，酵母中大肠杆菌终结序列的重复焦点的结果是初步的能够得到一些东西。对另一个问题的分析，即酵母中的端到类系统，正在分析已报道的rDNA基因的重复部分。迄今为止，已经使用两维琼脂凝胶电泳方法建立了活性测量方法，其活性位点仅限于较窄的分布区域。将来，我想搜索和识别蛋白质以结合分布区域，并阐明本机生物中的整个焦点预防系统。

项目成果

Hidaka,M.: "A newly identified DNA replication terminuosite,<TerE>___ー,on the <Escherichia>___ー <coli>___ー chromosome" J.Bacteriol.173. 391-393 (1991)

Hidaka, M.：“<Escherichia>___<coli>___染色体上新鉴定的 DNA 复制末端位点 <TerE>___”J.Bacteriol.173 (1991)。

Horiuchi,T.: "Termination of chromosome Duplication in Procaryote (in Control of Cell Growth and Division:ed.by) A.Ishihama & H.Yoshikawa" Japan.Sci.Soci.Press/SpringerーVerlag Berlin, (1991)

Horiuchi, T.：“原核生物中染色体复制的终止（控制细胞生长和分裂：编者：A.Ishihama 和 H.Yoshikawa）”Japan.Sci.Soci.Press/Springer-Verlag Berlin，（1991）