新しい機能をもつキメラ型のミオシンの検索

寻找具有新功能的嵌合肌球蛋白

• 批准号: 09279227
• 负责人: 大石 昇
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09279227/
• 关键词: 分子モーター; ミオシン; PCR; 分子生物学

ディクチオ型細胞性粘菌から新しい機能をもつキメラ型のミオシンの検索を試みた。はじめに、キメラ型のミオシンIII、IX、Xに近縁のミオシンを、これらのファミリー間で相同性が高く他のファミリー間では相同性が低い3個所の短い共通な配列をプライマーとしてゲノムDNAからPCR行い、検索を試みたが、新しいミオシンは発見できなかった。次に、モータードメイン内の共通配列である、Pループ、およびスイッチ2と呼ばれる領域について、キメラ型のミオシンIII、IX、Xの塩基配列をもとにプライマーを作成し、ゲノムDNAを鋳型としてPCRを行ったところ、既知のミオシン2のほかにこれまで報告の無い配列を含むミオシンに類似した配列が1つ確認できた。その配列には、キメラ型のミオシンIII、IX、Xと同様に、保存性の低いループ領域でのアミノ酸の挿入が多数見られ、またPループからスイッチ2までの配列を他のミオシンと比較すると、これまで知られているどのミオシンファミリーとも相同性が低いことがわかった。また、増殖期の細胞性粘菌から作成したcDNAを鋳型として、同様にPCRを行ったところ、この遺伝子の産物と思われるバンドが確認されたので、偽遺伝子ではないことがわかった。この新しいミオシンが、キメラ型である可能性は高いと思われ、遺伝子の全長の決定と、ノックアウト作成による機能の確認の実験が進行中である。さらに、特定のミオシンの、モータードメイン内の共通配列をもとにしたPCRによる検索が、新しいミオシンの検索に有効であることが確認できたので、プライマーのデザインを変えることにより、他の新しいミオシンの発見が期待される。

我们试图从dictio型细胞粘液模具中搜索具有新功能的嵌合肌球蛋白。首先，我们尝试使用三个短的常见序列与嵌合肌球蛋白III，IX和X密切相关，这些序列是这些家族之间高度同源的，其他家庭之间的同源性低，而PCR是从基因组DNA作为引物进行的，但是找不到新的肌球蛋白。接下来，基于嵌合肌球蛋白III，IX和X核苷酸序列在电动机结构域中的P环和开关2创建，并使用基因组DNA作为模板进行了PCR，除了已知的肌球蛋白2，另外一个类似于含有肌动蛋白的序列，该序列含有未曾报道过的序列。这些序列显示在环路区域中的许多氨基酸插入，具有较低的特性，类似于嵌合肌球蛋白III，IX和X，并且在将P Loop与其他肌球蛋白的序列进行比较时，发现它们与任何已知肌球蛋白家族的同源性较小。此外，当使用在生长阶段作为模板中用细胞粘液模具产生的cDNA进行PCR时，似乎是该基因的产物，并发现它不是假元。看来这种新的肌球蛋白可能是嵌合，并且正在进行实验以确定完整的基因长度并通过创建敲除确认其功能。此外，已经证实，基于运动域内的共同序列搜索特定肌球蛋白的PCR可有效寻找新的肌球蛋白，并且通过更改引物的设计，可以预计会发现其他新的肌球蛋白。