肉腫から分泌されるエクソソームによる細胞間クロストークの包括的解析

肉瘤分泌的外泌体对细胞间串扰的综合分析

• 批准号: 22H03197
• 负责人: 松峯 昭彦
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03197/
• 关键词: 肉腫; エクソソーム; クロストーク; miRNA; １細胞遺伝子発現解析; 細胞間クロストーク; 膜タンパク

同定したエクソソーム膜タンパクXの内、膜タンパクDを中心に研究をスタートした。膜タンパクDが微小環境内で生物学的活性を有しているかどうかの確証はまだ無い。そこで膜タンパクDと膜タンパクD陽性エクソソームの機能解析を以下の方法で行った。まず、膜タンパクXの肉腫での発現を免疫組織学的染色で確認し、予後との関連を解析した。膜タンパクX発現群は、肺転移が早期に出現するため予後が悪い傾向にあることが判明した。さらに、膜タンパクD陽性エクソソームを補足できるアッセイ系は既に確立しているので、患者血清の臨床サンプルを用いてELISA法にて検出した。現在、その結果を解析中である。また、臨床検体を用いた研究と共に、生物学的な機能を解析するための基礎的な研究も開始した。膜タンパクD遺伝子を過剰発現した肉腫細胞や、shRNAノックダウンした肉腫細胞株を作製し、形質の変化をin vitro, in vivoで解析中である。さらに、膜タンパクDを過剰発現した肉腫培養細胞や、shRNAノックダウンした肉腫培養細胞から回収した膜タンパクD陽性エクソソームをマウスに全身投与後、低肺転移肉腫細胞株をマウスに移植した。現在、肺転移数への影響を確認中である。さらに、膜タンパクD陽性エクソソームに内包されているmiRNAの解析をスタートした。微小環境内での細胞間シグナル伝達のキープレーヤーを同定することにつながるので大きな意味がある。独自に作成したnativeなエクソソーム膜タンパクDを認識する抗体、とエクソソームに発現する抗CD9抗体でエクソソームをマルチカラー染色し、フローサイトメーターで目的エクソソームを回収した。今後、回収したエクソソームからmiRNAを分離し、microRNA arrayを用いて解析する予定である。

在我们鉴定的外泌体膜蛋白 X 中，我们开始研究膜蛋白 D。目前尚未证实膜蛋白D在微环境中是否具有生物活性。因此，我们使用以下方法对膜蛋白D和膜蛋白D阳性外泌体进行功能分析。首先，我们通过免疫组织学染色证实了膜蛋白X在肉瘤中的表达，并分析了其与预后的关系。结果发现，表达膜蛋白X的组往往预后较差，因为肺转移出现较早。此外，由于已经建立了可以捕获膜蛋白D阳性外泌体的检测系统，因此可以使用患者血清的临床样本通过ELISA对其进行检测。我们目前正在分析结果。除了利用临床样本进行研究外，我们还开始了分析生物学功能的基础研究。我们已经创建了过度表达膜蛋白 D 基因的肉瘤细胞和 shRNA 敲低的肉瘤细胞系，目前正在分析体外和体内性状的变化。此外，将从过度表达膜蛋白D的培养肉瘤细胞或shRNA敲低的培养肉瘤细胞中回收的膜蛋白D阳性外泌体全身给予小鼠，并将肺转移低的肉瘤细胞系移植到小鼠体内。我们目前正在确认对肺转移数量的影响。此外，我们已经开始分析膜蛋白 D 阳性外泌体中包含的 miRNA。这具有重要意义，因为它将导致微环境内细胞间信号转导关键参与者的识别。使用独立创建的识别天然外泌体膜蛋白 D 的抗体和外泌体中表达的抗 CD9 抗体对外泌体进行多色染色，并使用流式细胞仪收集目标外泌体。未来，我们计划从收集的外泌体中分离miRNA，并使用microRNA阵列对其进行分析。

项目成果

橈骨遠位部に発生した骨肉腫に対して術中体外照射と腱再建を行った1例

术中外照射放射治疗及肌腱重建治疗桡骨远端骨肉瘤一例。

• 发表时间: 2023
• 作者: 渡邉 裕美子;田中 太晶;髙橋 藍;山岸 永典;松峯 昭彦
• 通讯作者: 松峯 昭彦

Endobronchial Watanabe Spigotが原因と思われる急性進行性気腫性肺嚢胞の1例【研修医セッション「優秀演題賞」】

疑似由支气管内渡边插管引起的急性进行性肺气肿性肺囊肿一例[优秀演讲奖]

• 发表时间: 2022
• 作者: 小林 健寿;左近 佳代;佐々木 正人;田中 楓;岡田 晃斉;安斎 正樹;細川 泰;山岡 幸司;木村 聡美;近澤 亮;三ツ井 美穂;島田 昭和;山口 牧子;園田 智明;門脇 麻衣子;早稲 田優子;梅田 幸寛;石塚 全
• 通讯作者: 石塚 全

難治性軟部腫瘍を対象とするNY-ESO-1 TCR-T細胞療法及びナノ粒子ワクチン併用・前処置非使用療法の第1相治験

NY-ESO-1 TCR-T细胞疗法与纳米颗粒疫苗联合疗法无需预处理治疗难治性软组织肿瘤1期临床试验

• 发表时间: 2023
• 作者: 石原 幹也;西田 佳弘;北野 滋久;川井 章;原田 直純;宮原 慶裕;服部 浩佳;高田 弘一;江森 誠人;角永 茂樹;遠藤 誠;松本 嘉寛;笹田 哲朗;佐藤 永一;山田 知美;松峯 昭彦;永田 康浩;渡辺 隆;影山 愼一;珠玖 洋
• 通讯作者: 珠玖 洋

大腿骨近位置換術の5つのtips

股骨近端置换术的 5 个技巧

• 发表时间: 2022
• 作者: 田中 太晶;渡邉 裕美子;出淵 雄哉;松峯 昭彦
• 通讯作者: 松峯 昭彦

骨軟部発生PEComaの臨床・病理学的特徴（JMOG 053 study）

骨和软组织 PEComa 的临床和病理特征（JMOG 053 研究）

• 发表时间: 2023
• 作者: 出淵 雄哉;浜田 俊介;丹澤 義一;今西 淳悟;小松原 将;小柳 広高;嶋谷 彰芳;藤田 郁夫;田中 太晶;上田 孝文;河野 博隆;松峯 昭彦
• 通讯作者: 松峯 昭彦