Elucidation of the mechanism of hepatitis B virus entry and control of infection by entry inhibitors

阐明乙型肝炎病毒侵入机制以及侵入抑制剂控制感染

基本信息

批准号：
22H03062
负责人：
伊藤清顕
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

B型肝炎ウイルス（HBV）はpreS1領域のN末端側やC末端側の疎水性領域を利用してNTCPとの結合やエンドソーム膜と膜融合して巧みに細胞内に侵入している。我々は、この侵入機構に対して、胆汁酸の一般的な性質である疎水面と親水面を持つ両親媒性物質としての界面活性作用と側鎖の電荷を利用して効果的に阻害する方法を構築してきた。これまでに胆汁酸誘導体INT-767がHBVとその受容体であるNTCPとの結合を強力に阻害することを明らかにした。本研究において、INT-767の侵入阻害メカニズムを分子レベルで解析することによりHBVの肝細胞への侵入機構を詳細に解析した。これまでの研究成果により、preS1領域とNTCPとの結合を評価するpreS1 binding assayを使用した実験を繰り返すことにより、INT-767のHBVに対する侵入阻害機構が分子レベルで明らかになった。まずpreS1領域NTCP結合モチーフの疎水性アミノ酸集積部を親水性アミノ酸に置換したところ、INT-767による結合阻害効果は減弱した。また、preS1領域NTCP結合モチーフの疎水性アミノ酸集積部はそのままで、正電荷側鎖を持つアミノ酸を側鎖の電荷を持たないアミノ酸に置換したところ、INT-767による結合阻害効果はさらに減弱した。以上のことから、INT-767の胆汁酸ステロイド骨格の疎水面とNTCP結合モチーフに存在する疎水性アミノ酸集積部が疎水結合すること、さらにはINT-767の側鎖の負電荷が正電荷側鎖を持つアミノ酸とイオン結合することによりHBVに強固に結合し、NTCPとの結合を阻害することを明らかにした。

丙型肝炎病毒（HBV）在PER1区域的N末端和C末端使用疏水区，以与内体膜结合NTCP和膜融合，并巧妙地侵入细胞。我们已经构建了一种通过使用表面活性剂作用和侧链电荷作为具有疏水和亲水性表面的两亲物的方法来有效抑制这种侵袭机制的方法，这是胆汁酸的常见特性。到目前为止，已经揭示了胆汁酸衍生物INT-767强烈抑制HBV与其受体NTCP的结合。在这项研究中，我们分析了在分子水平上侵袭INT-767的机制，以详细分析HBV侵袭到肝细胞中的机理。先前的研究结果揭示了通过使用PRES1结合测定的重复实验，通过重复实验对INT-767在分子水平上的侵袭机制进行了评估，该实验评估了PRES1区域与NTCP的结合。首先，当疏水性氨基酸积累部分NTCP结合基序的一部分被亲水氨基酸取代时，INT-767的结合抑制作用降低。此外，当Pres1区域NTCP结合基序的疏水氨基酸积累部分仍然完整时，当用带正电荷侧链的氨基酸用氨基酸无需侧链的氨基酸代替INT-767的结合抑制作用进一步降低。从上面可以看出，NTCP结合基序中存在的INT-767的胆汁酸类固醇骨骼的疏水表面和疏水氨基酸的积累部分是疏水的，并且INT-767的侧链的负电荷与Int-767的侧链与氨基酸的侧链与阳性式侧链结合，从而结合了固定的结合。