メモリー様分化誘導を基盤とした多種類のがんに有効なCAR-NK細胞製剤の新規開発

基于记忆样分化诱导的 CAR-NK 细胞制剂的新进展，可有效对抗多种癌症

• 批准号: 22H03036
• 负责人: 今井 千速
• 金额: $ 10.9万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03036/
• 关键词: キメラ抗原受容体; NK細胞; CAR-T細胞; NK細胞受容体; NKp44; CAR-NK細胞; メモリー様NK細胞; 肉腫; 小児がん

第3者健常成人由来CAR-NK細胞製剤の新規開発を最終目標に、本研究ではメモリー様NK細胞の製造法の新規技術ならびに新規CAR遺伝子の開発を目指して、（１）NK細胞のメモリー様分化の分子基盤と誘導法の解明、製造法および遺伝子改変法の確立、（２）膜型サイトカインの新規開発、（３）NK細胞における最適なシグナルドメインの同定、（４）開発したNK細胞製剤の有用性の証明（in-vitro / ヒト腫瘍の異種移植マウスモデル）、の4項目に沿って研究を進めている。（１）については従来型のフィーダー細胞を用いる培養と複数サイトカインと刺激抗体による培養との比較検討を、複数のドナーについて実施中である。開始年度には、世界情勢の影響によりNK細胞用特殊培地がまったく入手できなくなる事態が生じたが、その間は、本邦で入手できる別培地の評価を行った。（２）膜型サイトカインについてはＸ遺伝子の膜結合型コンストラクトをデザイン、ベクターを作成、ウイルスベクターにより細胞株やヒトNK細胞に遺伝子導入し、同コンストラクトが膜結合の状態で膜表面にサイトカインＸを発現できることを確認した。機能について検討中である。（３）CD3zに加えて4-1BBまたはCD28などの共刺激受容体シグナルドメインを追加することで、CAR-NK細胞の傷害活性の亢進が確認されている。これら以外の共刺激分子の評価のため、NKp44-CARをベースに５つの異なるコンストラクトを作成した。まずはCAR-T細胞における評価中である。ヒト腫瘍検体RNAにおけるNKp44リガンド発現を検討し、発現が確認された。（４）異種腫瘍を生着させたマウスモデルの作成を複数の腫瘍系について行った。ルシフェラーぜによる腫瘍細胞増殖のモニタリングが可能であることを確認した。NK細胞/CAR-NK細胞のIn vivo機能評価を準備した。

该研究的最终目标是从第三方健康的成年人开发新的Car-NK细胞配方，旨在开发新的技术，以生产记忆样的NK细胞和新的CAR基因，并根据四类进行研究，（（1）阐明分子基础和诱导NK细胞的记忆，建立了3个杂种方法（2），（2）开发了新的范围（2），（2）cy cy cy cy（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2）（2），（2） NK细胞中的最佳信号结构域，以及（4）开发的NK细胞配方的有用性（人类肿瘤的体外/异种移植小鼠模型）。关于（1），使用多种细胞因子和刺激抗体的培养物进行比较，正在为多个供体进行。在由于全球情况的影响，NK细胞的特殊介质变得无法获得的那一年，但是在此期间，对日本可用的单独培养基进行了评估。 （2）对于膜型细胞因子，设计了X基因的膜结合的构建体，创建了一个载体，并使用病毒载体将基因转移到细胞系和人NK细胞中，并确认该结构可以在膜结合状态下的膜表面上的膜表面表达细胞因子X。正在考虑功能。 （3）除了CD3Z外，通过添加诸如4-1BB或CD28之类的共刺激受体信号结构域（例如4-1BB或CD28）证实了CAR-NK细胞的损伤活性的增加。为了评估其他共刺激分子，基于NKP44-CAR创建了五个不同的构建体。首先，正在CAR-T细胞中评估它。研究了NKP44配体在人肿瘤标本RNA中的表达，并证实了表达。 （4）为多种肿瘤系统创建了一个刻有异源肿瘤的小鼠模型。已经证实，可以通过卢西法拉监测肿瘤细胞的增殖。制备了NK细胞/CAR-NK细胞的体内功能评估。

项目成果

Acute fulminant intravascular hemolysis induced by Clostridium perfringens in a symptomatic multiple myeloma patient under immuno-chemotherapy

免疫化疗下有症状的多发性骨髓瘤患者产气荚膜梭菌引起的急性暴发性血管内溶血

• DOI: 10.1007/s00277-022-05010-7
• 发表时间: 2022
• 期刊: Annals of Hematology
• 影响因子: 3.5
• 作者: Yamamoto Hideyuki;Mizutani Yuki;Iriyama Chisako;Goto Naoe;Okamoto Akinao;Kato Toshiharu;Shintani Chiyo;Yamamoto Naoki;Miyama Takahiko;Mihara Keichiro;Okamoto Masataka;Tomita Akihiro
• 通讯作者: Tomita Akihiro

Discontinuation of tyrosine kinase inhibitors in pediatric chronic myeloid leukemia

小儿慢性粒细胞白血病中酪氨酸激酶抑制剂的停用

• DOI: 10.1002/pbc.29699
• 发表时间: 2022
• 期刊: Pediatric Blood & Cancer
• 作者: Shima Haruko;Kada Akiko;Tanizawa Akihiko;Sato Iori;Tono Chikako;Ito Masaki;Yuza Yuki;Watanabe Akihiro;Kamibeppu Kiyoko;Uryu Hideko;Koh Katsuyoshi;Imai Chihaya;Yoshida Nao;Koga Yuhki;Fujita Naoto;Saito Akiko M.;Adachi Souichi;Ishii Eiichi;Shimada Hiroyuki
• 通讯作者: Shimada Hiroyuki

Generation of chimeric antigen receptor-transduced natural killer cells by using a feeder cell-free system

使用无饲养细胞系统生成嵌合抗原受体转导的自然杀伤细胞

• 发表时间: 2022
• 作者: Nobuhiro Kubo;Minori Baba;Chansu Shin;Ryosuke Hosokai;Haruko Iwabuchi;Masaru Imamura;Akihiko Saitoh;Chihaya Imai
• 通讯作者: Chihaya Imai

未治療移植非適応骨髄腫に対するdaratumumab 併用レジメンと微小残存病変

达雷妥尤单抗联合方案和微小残留病治疗未经治疗的不适合移植的骨髓瘤

• 发表时间: 2022
• 期刊: 血液内科
• 作者: 美山貴彦;三原圭一朗
• 通讯作者: 三原圭一朗

骨髄腫に対する治療薬・治療法の特徴 モノクローナル抗体．

骨髓瘤治疗药物和治疗方法的特点：单克隆抗体。

• 发表时间: 2022
• 期刊: 内科
• 作者: 美山貴彦;三原圭一朗
• 通讯作者: 三原圭一朗