新規ミトコンドリア蛋白質の構造異常によるALS病態の解析と評価モデル系の開発

新型线粒体蛋白结构异常引起的ALS病理分析及评估模型系统开发

• 批准号: 22H02950
• 负责人: 漆谷 真
• 金额: $ 10.4万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02950/
• 关键词: 筋萎縮性側索硬化症; FUS; DHX30; RNA; 低分子スクリーニング; Fused in sarcoma (FUS); 変異遺伝子スクリーニング

申請期間で予定している研究計画はDHX30をALSの病態を握る鍵分子と捉え、①FUSとDHX30の結合を阻止する分子をスクリーニングし、②PiggyBacシステムを用いて作出する新たな変異FUSトランスジェニックマウスを作出し、有効性を検討する。③原因遺伝子が未決定の家族性ALS患者においてDHX30遺伝子解析を行い、変異遺伝子の同定と病原性の検証を行う。④作出変異について②と同技術を用いてトランスジェニックマウスを作製し、表現型解析を行う。というものである。2022年度は以下の成果が得られた。①共同研究者である徳島大学和泉、森野が100例のALS患者の遺伝子解析を行い、その一部にDHX30の一塩基置換変異を認め、一部は毒性が示唆される変異であったが非ALS対照群と頻度に有意差がなかった。②2400個のFDA承認薬剤についてDHX30-FUSの結合阻止低分子のスクリーニングを行い結合阻止する分子24個、結合を増強する分子を6個同定した。FUSのknock-in細胞を作成し、DHX30の遺伝子導入後の共焦点顕微鏡検査法所見を用いた結合阻止効果の評価系を確立した。③家族性ALSにおけるDHX30の遺伝子変異の検索を継続中で有り、その間、家族性ALSの原因となるP525L FUSの新たなノックインマウスの作製を開始した。エクソンの変異のみでは表現型がわずかであると報告されており、3末端非翻訳領域の変異コンストラクトを構築中である。CRSP-CAS9を用いた2段階のノックイン作業を進めており、第1段階のマウスが生まれたところである。

在申请期间计划的研究计划将将DHX30视为具有ALS病理病理学的关键分子，并将筛选阻断FUS和DHX30结合的分子，以及2）创建使用PiggyBac系统创建的新型突变Fus转基因小鼠，并检查其效率。 ③在尚未确定致病基因的家族性ALS患者中进行DHX30基因分析，并鉴定出突变基因和致病性。 ④关于生产突变，使用与②②中相同的技术产生转基因小鼠，并进行了表型分析。就是这样。在2022年：1）托库希马大学（Tokushima University）的合作者Izumi和Morino进行了以下结果，对100名ALS患者进行了遗传分析，其中一些显示了DHX30的单基碱基取代突变，有些突变表明毒性没有显着差异，但与非ALS对照组的频率没有显着差异。 ②对于2,400种FDA批准的药物，我们筛选了遮挡DHX30-固定结合的小分子，并鉴定了6个分子，这些分子被鉴定出增强的结合。制备FUS敲击细胞，并建立系统，以使用DHX30基因转移后使用共聚焦显微镜发现评估结合抑制作用。 ③我们继续在家族性ALS中搜索DHX30中的基因突变，在此期间，我们开始创建新的P525L FUS敲入小鼠，该p525L FUS导致家族性ALS。据报道，仅外显子突变具有较小的表型，目前正在构建三端非翻译区域的突变构建体。我们目前正在使用CRSP-CAS9进行两阶段的敲门操作，而第一阶段鼠标刚刚出生。

项目成果

Long term observation of the cytosolic TDP-43 conformations in the phenotypes of FTLD/ALS in mice

小鼠 FTLD/ALS 表型中胞质 TDP-43 构象的长期观察

• 发表时间: 2022
• 作者: 和田英貴;引網亮太;楠井真季子;南山素三雄;浅田めぐみ;小代明美;漆谷 真
• 通讯作者: 漆谷 真

論文公開のお知らせ（和田英貴先生）

论文发表通知（和田秀隆教授）

論文公開のお知らせ（引網亮太先生）

论文发表通知（Ryota Hikiami教授）

プロジェクト

项目

ALSにおける治療薬開発ー病態解明の双方向性と今後の展開

ALS治疗药物开发——病理阐明的双向性和未来发展

• 发表时间: 2022
• 作者: 和田英貴;引網亮太;楠井真季子;南山素三雄;浅田めぐみ;小代明美;漆谷 真;漆谷 真
• 通讯作者: 漆谷 真